طراحی و ساخت پلاسمیدهای خاموشی ژن سری ‭ABRII‬

خاموشی ژن از طریق ‭RNAi ‬یکی از روش های پیشرفته و کارآمد در بیوتکنولوژی کشاورزی است که در بسیاری از زمینهصهای مختلف اعم از شناخت عمل ژنصهای ناشناخته، تولید گیاهان مقاوم به بیماری و مهندسی چرخهصهای متابولیسمی در جهت افزایش یا کاهش یک فراورده بیولوژیکی، کاربرد دارد. اصلی ترین ابزار در تکنیک ‭RNAi‬، پلاسمیدهایی است که بتوان قطعات سنس و آنتیصسنس ژن هدف را در آن کلون کرد. لذا هدف از انجام تحقیق حاضر، ساخت سازهصهای خاموشی ژن ‭(RNAi) ‬به عنوان ابزارهای اساسی و اولیه مورد نیاز برای خاموشی ژنصها در گیاهان هدف انجام پذیرفت. در این راستا، پلاسمید ‭pCAMBIA‬‮‭3300‬ به عنوان ناقل اولیه برای ساخت سازهصهای مد نظر، انتخاب شد. در ادامه محل پروموتر، ترمیناتور، اینترون ها و جایگاهصهای آنزیمی بر روی آن طراحی و کلون شد. پروموتر و ترمیناتور در سازهصها بترتیب‭CaMV‬‮‭35‬‭S ‬و‭CaMV‬‮‭35‬‭S polyA ‬بودند. اینترونصها عبارت بودند از: اینترون 2 از ژن ‭ST-LS‬1، اینترون 3 از ژن ‭ST-LS‬1 و اینترون 1 از ژن ‭ST ACS‬2 از گیاه سیبصزمینی ‭(Solanumtuberosum). ‬کارایی پروموتر از طریق بیان ژن ‭gus ‬مورد تایید قرار گرفت. در آخر، 3 سازه یک اینترونی، 3 سازه 2 اینترونی، 1 سازه 3 اینترونی برای خاموشی یک یا چند ژن و 2 سازه بیانی فاقد اینترون ساخته شد. سازهصهای ساخته شده قابلیت استفاده برای پروژهصهای خاموشی ژن در مهندسی ژنتیک گیاهی را دارا میصباشند. کلید واژه ها: خاموشی ژن، پلاسمید، راه انداز، قطعات سنس و آنتیصسنس