همسانهسازی ژن FRY1 در وکتور بیانی pET
- سال انتشار: 1391
- محل انتشار: سومین همایش ملی بیوتکنولوژی کشاورزی ایران (گیاهی، دامی و صنعتی)
- کد COI اختصاصی: AGRIBIOTECH03_397
- زبان مقاله: فارسی
- تعداد مشاهده: 1101
نویسندگان
دانشجوی کارشناسی ارشد بیوتکنولوژی، دانشکدهی کشاورزی، دانشگاه گیلان
استادیار گروه بیوتکنولوژی، دانشکدهی کشاورزی، دانشگاه گیلان
استادیار گروه بیوشیمی، دانشکده علوم زیستی، دانشگاه تربیت مدرس
استادیار گروه بیوتکنولوژی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه گیلان
چکیده
ژن FRY1 FIERY1 در گیاه آرابیدوپسیس یک ژن واکنشگر به تنشهای غیر زیستی بوده و آنزیم اینوزیتول فسفات- 1- فسفاتاز را کد میکند. از جمله نقشهای مهم آنزیم FRY1 تجزیهی پیامبر ثانویهی اینوزیتول 1 و 4 و 5 تری فسفات IP3 و تغییر درمیزان Ca+ 2 سیتوزول میباشد. از دیگر فعالیتهای آنزیم FRY1 میتوان به تجزیهی PAP که در فرایند خاموشی ژن در سلول نقش دارد اشاره نمود. لذا آنزیم FRY1 از اهمیت ویژهای در مطالعهی سیستم های پیامرسانی سلول برخوردار است. هدف از این تحقیق، همسانهسازی ژن FRY1 در سیستم بیانی pET به منظور بررسی فعالیت آنزیمی آن در شرایط invitro است. لذا از بافتهای رویشی گیاه آرابیدوپسیس RNA استخراج و پس از ساخت cDNA نسخهی cDNA ژن FRY1 ا پرایمرهای اختصاصی 5-GCTTGACATATGATGTCTATCAATTGTTTTCG-3' حاوی جایگاه برشی NdeI و -GCGGCCGCTCAGAGAGCTGAAGCTTTCTCTTG-3' 5 با جایگاه برشی NotI تکثیر شد. محصول PCR در وکتور pTG19-T وارد پلاسمید نوترکیب pTG19-T:FRY1 اقدام به برش آن با آنزیمهای NdeI و NotI و جداسازی FRY1 گردید. پس از خالصسازی نسخهی cDNA ژن FRY1 ز ژل آگارز، این قطعه در وکتور بیانی pET28a وارد گردید و به باکتری E.coli(DH5α انتقال داده شد. پس از همسانهسازی و استخراج پلاسمید نوترکیب pET28a:FRY1 به منظور تایید حضور نسخهی cDNA ژن FRY1 در سازهی ژنی فوق از 2 روش برش آنزیمی با استفاده از آنزیمهای BamHI و NdeI-NotI و توالییابی قطعهی مورد نظر استفاده شد. سپس سازهی نوترکیب pET28a:FRY1 جهت بیان مضاعف پروتئین FRY1 به باکتری BL21(DE3) انتقال یافت.کلیدواژه ها
مقالات مرتبط جدید
- مقایسه درصد ترکیب تاج پوشش کلاسهای خوشخوراکی در سه رویشگاه مرتعی چهاردانگه ساری
- تاثیر تغییرات اقلیم بر اشتغال در بخش کشاورزی: مروری تحلیلی
- Land reform in some developing countries: A review
- شناسایی ژنوتیپهای امیدبخش گندم نان با استفاده از تحلیل روابط بین صفات و تجزیه خوشه ای
- Harnessing Renewable Energy for Environmental Sustainability: The Role of Wind Power in Carbon Reduction
اطلاعات بیشتر در مورد COI
COI مخفف عبارت CIVILICA Object Identifier به معنی شناسه سیویلیکا برای اسناد است. COI کدی است که مطابق محل انتشار، به مقالات کنفرانسها و ژورنالهای داخل کشور به هنگام نمایه سازی بر روی پایگاه استنادی سیویلیکا اختصاص می یابد.
کد COI به مفهوم کد ملی اسناد نمایه شده در سیویلیکا است و کدی یکتا و ثابت است و به همین دلیل همواره قابلیت استناد و پیگیری دارد.