تکثیر و همسانه سازی ژن پروتئین حرکتی ویروس لکه حلقوی نکروتیک هسته داران در Escherichia coli
- سال انتشار: 1398
- محل انتشار: نخستین کنگره بیماری شناسی گیاهی ایران
- کد COI اختصاصی: PPC01_154
- زبان مقاله: فارسی
- تعداد مشاهده: 364
نویسندگان
دانشگاه زنجان، دانشکده کشاورزی، گروه گیاهپزشکی
دانشگاه زنجان، دانشکده کشاورزی، گروه گیاهپزشکی
دانشگاه زنجان، دانشکده کشاورزی، گروه گیاهپزشکی
چکیده
ویروس لکه حلقوی نکروتیک درختان هسته دار (Prunus necrotic ring spot virus) از ویروسهای مهم آلوده کننده مختلف سبب ایجاد علائم متفاوتی میکند و در درختان علائمی چون مرگ جوانه ها، کاهش رشد و ایجاد لکه های نکروز و غربالی میکند که درنهایت سبب کاهش کمی و کیفی محصول میشود. هدف از انجام این مطالعه، شناسایی ویروس لکه حلقوی بر اساس ژن پروتئین حرکتی از باغات برخی مناطق استان زنجان و همسانه سازی آن در باکتری E.coli به منظور تهیه سازه بیانی است. بدین منظور حدود 60 نمونه مشکوک به این ویروس بر اساس علائم توصیف شده جمع آوری شد. با توجه به جدایه های ویروس لکه حلقوی نکروتیک هسته داران در بانک ژن آغازگرهای مناسب برای تکثیر کامل ژن پروتئین حرکتی با استفاده از نرم افزار Primer Primer طراحی شدند. با توجه به اینکه قطعه تکثیرشده به منظور بیان در سیستم پروکاریوتی تکثیر خواهد شد محل برش آنزیمهای مناسب (BamHI, SacI) در آغازگرهای مستقیم و معکوس جهت در قاب بودن ژن موردنظر طراحی شد. با استفاده از آغازگرهای طراحیشده در آزمون پی سی آر قطعه موردنظر تکثیر شد. جدایه های تکثیر یافته جهت بررسی تنوع ژنتیکی تعیین توالی شدند و با استفاده از نرم افزار MEAG X جایگاه فیلوژنتیکی آنها بررسی شد. آنالیز فیلوژنتیکی نشان داد ارتباطی بین موقعیت جغرافیایی و میزبان با ژن پروتئین حرکتی وجود ندارد و جدایه های موردبررسی در زیرگروه PV96-II قرار میگیرند. سپس ژن پروتئین حرکتی یکی از جدایه ها به پلاسمید pTG19 متصل با استفاده از آنزیم T4 لیگاز متصل شد. سازه ساختهشده با استفاده از روش شوک حرارتی درون سلول مستعد E.coli منتقل شدند. در مرحله بعد کلونها را با روش پیسیآر کلونی تائید شدند و قطعه مربوط به ژن پروتئین حرکتی در کلونهای مثبت تکثیر شد. از کلونهای مثبت استخراج پلاسمید انجام گرفت و برای برش با آنزیم جهت خارج کردن قطعه و قرار دادن آن در پلاسمید بیان (pET28) آماده شدند. همچنین پلاسمیدهای استخراج شده جهت اطمینان از درج صحیح قطعه تعیین توالی شدند.کلیدواژه ها
مقالات مرتبط جدید
- نقش طب آیورودا، صابون های درمانی و روغن های گیاهی در سلامت و آرامش گردشگریسلامت و توریسم درمانی"
- اثر ارتفاع بر برخی از خصوصیات مورفولوژیکی harmala Peganum و تنوع ژنوتیپی در ۳ منطقه از استان مازندران
- تهیه و کاربرد نانوذرات نقره دوپ شده با هیدروکسیآپاتیت مشتق شده از استخوان مرغ در کاهش رنگ متیلن بلوMB
- بررسی اثر ترکیب هورمونی، شرایط نوری و نوع ریسنمونه بر کبلوسزایی گیبه دارویی گسنهUrtica dioica L
- تاثیر تنش شوری وبرخی بهبود دهنده ها بر محتوای فلاوونوئیدی و آنتوسیانینی گیاه کاملینا
اطلاعات بیشتر در مورد COI
COI مخفف عبارت CIVILICA Object Identifier به معنی شناسه سیویلیکا برای اسناد است. COI کدی است که مطابق محل انتشار، به مقالات کنفرانسها و ژورنالهای داخل کشور به هنگام نمایه سازی بر روی پایگاه استنادی سیویلیکا اختصاص می یابد.
کد COI به مفهوم کد ملی اسناد نمایه شده در سیویلیکا است و کدی یکتا و ثابت است و به همین دلیل همواره قابلیت استناد و پیگیری دارد.