محلول سازی و تا خوردگی مجدد اجسام اینکلوژن پروتئین نو ترکیب پوششی ویروس برگ باد بزنی مو تولید شده در Escherichia coli
- سال انتشار: 1398
- محل انتشار: فصلنامه بیوتکنولوژی کشاورزی، دوره: 11، شماره: 1
- کد COI اختصاصی: JR_JOAGK-11-1_008
- زبان مقاله: فارسی
- تعداد مشاهده: 882
نویسندگان
گروه بیماری شناسی گیاهی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران
گروه بیوفیزیک، دانشکده علوم زیستی، دانشگاه تربیت مدرس
گروه ویروس شناسی، دانشگاه واخنینگن، واخنینگن، هلند
دانشگاه تربیت مدرس
چکیده
هدف: سطوح بالای بیان ژن های خارجی در سلول های میزبان به ویژه در باکتری ها اغلب منجر به تشکیل اجسام اینکلوژن[1] میشود. وجود اسیدآمینه سیستئین در ساختار پروتئینها به تشکیل این اندامک نیز کمک میکند. پیوندهای دیسولفیدی درون و بینمولکولهای پروتئین غنی از سیستئین پوششی ویروس برگ بادبزنی مو باعث تشکیل اجسام اینکلوژن پس از بیان در Escherichia coli میشود. از اینرو به منظور بهدست آوردن پروتئین نوترکیب با ساختار طبیعی، ضروری است پروتئینهای تولید شده در سلول باکتری به شکل محلول درآیند. مواد و روش: در مطالعه حاضر برای تاخوردگی مجدد ساختار پروتئینها از حلال آمفیپاتیک 2 متیل 2،4پنتان دیول (MPD) در حضور سدیم دودسیل سولفات (SDS) استفاده شد. به این منظور ابتدا اجسام اینکلوژن حاوی پروتئین پوششی نامحلول ویروس برگ بادبزنی مو با استفاده از عامل دناتوره کننده سدیم دودسیل سولفات محلول شد. سپس پروتئین پوششی محلول با استفاده از روش کروماتوگرافی اندازه[2] خالصسازی شد و در نهایت پروتئینهای پوششی خالص با استفاده از روش MPD/SDS تاخورده شدند. نتایج: تصاویر میکروسکوپ الکترونی عبوری تاخوردگی مجدد ذرات شبهویروسی برگ بادبزنی مو را تایید کرد. نتیجه گیری: به نظر میرسد حلال MPD سبب تعدیل خواص دناتوره کننده سدیم دودسیل سولفات شده و به این ترتیب روشی ساده، کارآمد و موثر برای تاخوردگی مجدد پروتئین پوششی غنی از سیستئین ویروس برگ بادبزنی مو معرفی شد. [1]- inclusion body [2]- size exclusion chromatographyکلیدواژه ها
پروتئین غنی از سیستئین, کروماتوگرافی اندازه, میکروسکوپ الکترونیاطلاعات بیشتر در مورد COI
COI مخفف عبارت CIVILICA Object Identifier به معنی شناسه سیویلیکا برای اسناد است. COI کدی است که مطابق محل انتشار، به مقالات کنفرانسها و ژورنالهای داخل کشور به هنگام نمایه سازی بر روی پایگاه استنادی سیویلیکا اختصاص می یابد.
کد COI به مفهوم کد ملی اسناد نمایه شده در سیویلیکا است و کدی یکتا و ثابت است و به همین دلیل همواره قابلیت استناد و پیگیری دارد.