بهینه سازی تولید پروتئین نوترکیب کریپتوکروم DASH1 جلبک سبز Volvox carteri در باکتری Escherichia coli: بررسی حلالیت و اتصال به DNA
- سال انتشار: 1397
- محل انتشار: فصلنامه بیوتکنولوژی کشاورزی، دوره: 10، شماره: 4
- کد COI اختصاصی: JR_JOAGK-10-4_009
- زبان مقاله: فارسی
- تعداد مشاهده: 883
نویسندگان
دانشجوی دکتری تخصصی فیزیولوژی گیاهی، گروه زیست شناسی گیاهی، دانشکده علوم طبیعی، دانشگاه تبریز، تبریز، ایران
گروه زیست شناسی گیاهی، دانشکده علوم طبیعی، دانشگاه تبریز، تبریز، ایران
دانشیار، گروه بیوتکنولوژی دانشکده کشاورزی، دانشگاه شهید مدنی آذربایجان، کیلومتر ۳۵ جاده تبریز- آذر شهر، ایران
دانشیار، گروه زیست شناسی سلولی و تکوینی گیاهی، دانشگاه بیله فلد، بیله فلد، آلمان
چکیده
هدف: اپتوژنتیک به عنوان یک شاخه علمی جدید، از فتورسپتورها به منظور اجرای تحقیقات پایه ای و کاربردی استفاده می کند. یکی از راه های توسعه اپتوژنتیک، شناسایی فتورسپتورهای جدید و تعیین خصوصیات آن هاست. کریپتوکروم های DASH متعلق به خانواده پروتئینی کریپتوکروم/فتولیاز، فتورسپتورهای دارای قابلیت ترمیم DNA بوده و در مسیرهای پیام رسانی علامت نقش دارند. هدف این تحقیق، تولید کافی پروتئین پیش گویی شده کریپتوکروم DASH1 ولوکس (VcCryDASH1)، برای استفاده در مطالعات طیف جذبی و نیز بررسی قابلیت ترمیم DNA می باشد. مواد و روشها: ابتدا توالی کدکننده پروتئین VcCryDASH1 با استفاده از آغازگرهای اختصاصی، از کتابخانه cDNA جلبک Volvox carteri جداسازی و در پلاسمید بیانی pGEX-2TK همسانه سازی شد. تولید پروتئین نوترکیب در دو سویه متفاوت باکتری E. coli و همچنین تحت تاثیر زمان های مختلف القاء با IPTG و همچنین میزان انحلال پذیری آن توسط روش SDS-PAGE مورد ارزیابی قرار گرفت. بررسی قابلیت اتصال به DNA در این پروتئین، با روش همردیف سازی انجام شد. نتایج: تولید کافی پروتئین، در سویه Rosetta، در °C32، و زمان القاء بیش از 3 ساعت بدست آمد. در زمان القاء 1 و 3 ساعت، نیمی از پروتئین به صورت نامحلول بود. همردیف سازی پروتئین VcCryDASH1 مشخص نمود که درصد بالایی از آمینواسیدهای متصل شونده به DNA، در این پروتئین حضور دارند. نتیجه گیری: این نتایج نشان می دهند که پروتئین VcCryDASH1 تحت شرایط بهینه ، دارای قابلیت انحلال پذیری دوگانه بوده اما روش ما می تواند مقدار کافی آن را در باکتری E. coli سویه Rosetta تولید کند. همچنین بدلیل داشتن آمینواسیدهای حفاظت شده ، این پروتئین دارای قابلت اتصال به DNA می باشد که آن را به عنوان یک منبع احتمالی جهت طراحی مولکول های میانجی نور-DNA در اپتوژنتیک معرفی می نماید.کلیدواژه ها
سویه Rosetta, کریپتوکروم DASH1, وکتوربیانی, Volvox carteriاطلاعات بیشتر در مورد COI
COI مخفف عبارت CIVILICA Object Identifier به معنی شناسه سیویلیکا برای اسناد است. COI کدی است که مطابق محل انتشار، به مقالات کنفرانسها و ژورنالهای داخل کشور به هنگام نمایه سازی بر روی پایگاه استنادی سیویلیکا اختصاص می یابد.
کد COI به مفهوم کد ملی اسناد نمایه شده در سیویلیکا است و کدی یکتا و ثابت است و به همین دلیل همواره قابلیت استناد و پیگیری دارد.