بهینه سازی ترکیب محیط کشت به منظور تولید پروتیین DT-GCSF با استفاده از باکتری نوترکیب اشریشیاکلی در فلاسک لرزان
- سال انتشار: 1396
- محل انتشار: اولین کنفرانس بین المللی یافته های نوین در بیوتکنولوژی
- کد COI اختصاصی: BIOTECH01_047
- زبان مقاله: فارسی
- تعداد مشاهده: 813
نویسندگان
دانشجوی کارشناسی ارشد، مهندسی شیمی-بیوتکنولوژی، دانشگاه صنعتی مالک اشتر
استادیار گروه مهندسی شیمی-بیوتکنولوژی، پژوهشکده علوم و فناوری های زیستی، دانشگاه صنعتی مالک اشتر
دانشیار، پژوهشکده علوم و فناوری زیستی، دانشگاه صنعتی مالک اشتر، تهران
دانشیار، پژوهشکده علوم و فناوری زیستی، دانشگاه صنعتی مالک اشتر، تهران
چکیده
ایمونوتوکسین ها پروتیین های هیبریدی هدفمند، در راستای درمان سرطان می باشند، که از دو بخش ایمنی وتوکسینی تشکیل شده اند و به وسیله ی رابط های مشخصی به یکدیگر متصل می شوند DT-GCSF .متشکل از توکسین دیفتری و فاکتور محرک رشد گرانولوسیت GCSF انسانی،جهت درمان لوکمیای میلویید حادAML می باشد. در این تحقیق بهینه سازی ترکیب محیط کشت پیچیده به منظور بیان ایمونوتوکسین DT-GCSF بررسی شده است.جهت بیان DT-GCSF از باکتری سویهBL21(DE3) ترانسفورم شده با پلاسمید نوترکیبpET21b استفاده گردید. نوع محیط کشت ( Glucose LB+5g/l، SB،TB ) مقدار القاگر IPTG 0.05،0.1، mM 0.2 زمان القا 0.7 ، 2، 3.5 دمای القا (37 ،32 ، C °28) برای افزایش بیان در کشت فلاسک لرزان بر اساس روش تاگوجی بهینه سازی شده است. غلظت سلول بر اساس روش کدورت سنجی اندازه گیری شده و میزان بیان پروتیین توسط الکتروفورز روی ژلSDS-PAGE مورد بررسی قرار گرفته است. طبق نتایج بدست آمده محیط کشت TB شامل : g/l ( 5/12 K2HPO4: ، 3/2: KH2PO4 ،24 Yeast extract:، 12 peptone: ، 5: Glycerol)به عنوان محیط کشت بهینه تعیین شد. بهترین زمان القاء توسط IPTG با غلظت mM05/0، در دمایC °37 در کدورت نوری 3.5=OD600nm تعیین شد . بیشترین مقدار تولید بیومس و بیان پروتیین هدف در محیط کشت بهینه سازی شده به میزان.3.6=OD600nm تعیین گردید.کلیدواژه ها
اDT-GCSF، محیط کشت پیچیده، بهینه سازی، تاگوچیاطلاعات بیشتر در مورد COI
COI مخفف عبارت CIVILICA Object Identifier به معنی شناسه سیویلیکا برای اسناد است. COI کدی است که مطابق محل انتشار، به مقالات کنفرانسها و ژورنالهای داخل کشور به هنگام نمایه سازی بر روی پایگاه استنادی سیویلیکا اختصاص می یابد.
کد COI به مفهوم کد ملی اسناد نمایه شده در سیویلیکا است و کدی یکتا و ثابت است و به همین دلیل همواره قابلیت استناد و پیگیری دارد.