عطیه هاشمی - تهران، انستیتو پاستور ایران. بخش هپاتیت وایدز
فرزین روحوند - تهران، انستیتو پاستور ایران، بانک ژن توترکیب ایران
محمدحسین قهرمانی - تهران، دانشگاه تهران، دانشکده ی داروسازی
محمدرضا آقا صادقی - تهران، انستیتو پاستور ایران. بخش هپاتیت وایدز

انتقال ژن به سلولهای یوکاریوتی ضروریترین گام در راستای فهم عملکرد ژنها و محصولات ژنی همچنین پیشرفت در زمینه ی ژن درمانی محسوب می شود. در این مطالعه انتقال ژن به دو رده ی سلولی یوکاریوتی Vero و Huh- 7 از دو روش شیمیایی - از طریق بکارگیری دو ترکیب تجاری انتقال ژن - و فیزیکی با استفاده از الکتروپوراسیون بهینه و مقایسه شد. بهینه کردن انتقال ژن در روش شیمیایی با بکارگیری دانسیته های سلولی مختلف و نسبتهای مختلف ریبونوکلئیک اسید به ترکیب شیمیایی در هر دو رد ه ی سلولی انجام شد. همچنین به منظور بهینه سازی روش انتقال فیزیکی الکتروپوراسیون پارامترهای قدرت میدان الکتریکی و مدت زمان مجاورت سلولها با پالس الکتریکی بهینه شد. وکتور pEGFP-N1 به سلولها در شرایط متفاوت منتقل شد و بیان پروتئین فلوئورسانس سبز GFP با کمک فلوسایتومتر و میکروسکوپ فلوئورسانس سنجیده شد. در سلولهای Huh-7 بالاترین درصد انتقال ژن به کمک الکتروپوراسیون 63.74٪ با استفاده از 12.2% Lipofectarnine TM 2000 و با بکارگیری jetPEITM-HUVE 14.2% بدست آمد درحالیکه در رده ی سلولی Vero بالاترین درصد بدست آمده در انتقال ژن بکمک الکتروپوراسیون 73.9٪ و درصورت بکارگیری jetPEITM-HUVE 28٪ بود. همچنین افزودن DMSO به بافر الکتروپوراسیون بر میزان زنده بودن سلولها و درصد انتقال ژن در سلولهای Huh-7 بی تأثیر بود. با توجه به نتایج بدست آمده می توان از روش ساده و مقرون به صرف هی الکتروپوراسیون در انتقال ژن به دو رده ی سلولی یوکاریوتی Vero و Huh-7 استفاده کرد.

انتقال ژن، الکتروپوراسیون، Vero، Huh-7