بررسی اثر پری-پروی پروترومبین خوکی بر بیان فاکتور 9 انسانی در رده سلولی پستانداران
- سال انتشار: 1393
- محل انتشار: اولین کنگره بین المللی و سیزدهمین کنگره ژنتیک ایران
- کد COI اختصاصی: CIGS13_0302
- زبان مقاله: فارسی
- تعداد مشاهده: 815
نویسندگان
دانشگاه تربیت مدرس-دانشکده علوم زیستی-گروه ژنتیک- تهران-ایران
پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری- گروه ژنتیک مولکولی-تهران- ایران
دانشگاه تربیت مدرس-دانشکده علوم زیستی-گروه ژنتیک- تهران-ایران
چکیده
فاکتور 9 یکی از سرین پروتئازهای مسیر انعقادی با تعداد زیادی تغییرات پس از ترجمه است. مشابه با سایر پروتئین های وابسته به ویتامینKپروپپتید بعد از پپتید نشانه قرار دارد که نقش مهمی در گاما کربوکسیلاسیون ایفا میکند. پروترومبین یک پروتئین وابسته بهویتامینK است که در هموستازی نقش دارد، و به دلیل تمایل کم پروپپتید پروترومبین به آنزیم گاما کربوکسیلاز، به طور موثر گاماکربوکسیله میشود. به منظور بررسی تاثیر جایگزینی توالی پری-پرو پپتید در کارایی بیان فاکتور 9 انسانی، از توالی پری-پروی پروترومبین خوکی استفاده شد که 83 درصد تشابه در توالی اسیدهای آمینه با همتای انسانی خود دارد. کارایی پپتید نشانه پروترومبین خوکی و ساختار ثانویهmRNAبا برنامه های آنلاینmfold و signalP, prediSi, Toppredپیش بینی شد. با استفاده از تکنیکهای مولکولی، توالی کد کننده پری-پروی پروترومبین خوکی بهcDNAبالغ فاکتور 9 انسانی متصل شد و قطعات کایمریک ایجاد شده به موازات توالی بومی فاکتور 9 انسانی در رده سلولی پستانداران هدف آنالیزهای بیانی قرار گرفتند. تاًیید ترانسفکشن و ارزیابی بیان فاکتور 9 انسانی با روشهای الایزا، تست انعقادی، رسوبدهی باریوم سیترات RT- qPCR و RT-PCRانجام شد. براساس آنالیزهای بیوانفورماتیکی، زمانی که از توالی پری-پروی پروترومبین خوکی استفاده میشود، بیشترین کارایی ترشح فاکتور 9 انسانی مورد انتظار است. نتایج ما نشان داد که میزان ترشح و فعالیت انعقادی فاکتور 9 نوترکیب انسانی در سلولهایHEK293Tبرای کلونpProt::FIXدر مقایسه با کلون بومی فاکتور 9 بیشتر بود که بترتیب به دلیل تمایل بیشتر پپتید نشانه بهSRPو تمایل کمتر پروپپتیدپروترومبین به آنزیم گاما کربوکسیلاز است. میزان بیان ترانسژنهای فاکتور 9 در سطح رونویسی با روشqRT-PCR16 برابر افزایش بیان برای کلون pProt::FIXدر مقایسه با کلون بومی فاکتور 9 نشان از تاثیر چشمگیرتغییر توالی های نشانه پری-پرو بر روی نسخه برداری ژن مربوطه دا رد.کلیدواژه ها
فاکتور 9 انسانی ، Signal P, PrediSi ، پروترومبین خوکی، پروپپتیدمقالات مرتبط جدید
اطلاعات بیشتر در مورد COI
COI مخفف عبارت CIVILICA Object Identifier به معنی شناسه سیویلیکا برای اسناد است. COI کدی است که مطابق محل انتشار، به مقالات کنفرانسها و ژورنالهای داخل کشور به هنگام نمایه سازی بر روی پایگاه استنادی سیویلیکا اختصاص می یابد.
کد COI به مفهوم کد ملی اسناد نمایه شده در سیویلیکا است و کدی یکتا و ثابت است و به همین دلیل همواره قابلیت استناد و پیگیری دارد.