طراحی و بهینه‌سازی سیستم الایزای نقطه‌ای (Dot-blot ELISA) با آنتی‌ژن‌های اختصاصی برای تشخیص ساده و سریع مشمشه
- سال انتشار: 1398
- محل انتشار: مجله دانشکده علوم پزشکی نیشابور، دوره: 7، شماره: 2
- کد COI اختصاصی: JR_NUMS-7-2_002
- زبان مقاله: فارسی
- تعداد مشاهده: 302
نویسندگان
Department of Biology, Science and Research Branch, Islamic Azad University, Tehran, Iran
Department of Tuberculin & Mallein, Razi Vaccine & Serum Research Institute, Agricultural Research, Education and Extension Organization (AREEO), Karaj, Iran
Department of Veterinary Aerobic Bacteria Vaccines, Razi Vaccine & Serum Research Institute, Agricultural Research, Education and Extension Organization (AREEO), Karaj, Iran
Department of Biology, Science and Research Branch, Islamic Azad University, Tehran, Iran
چکیده
مقدمه مشمشه از قدیمی‌ترین بیماری‌های واگیر خطرناک و مشترک بین انسان و حیوان است که با ظهور جراحات گرانولوماتوزی قرحه‌ای در پوست و غشاهای مخاطی مشخص می‌شود. با توجه به گزارش حتی یک مورد بیماری و لزوم جلوگیری از انتشار آن با شناسایی و معدوم‌سازی میزبان‌های آلوده، شناسایی زودهنگام بیماری با روش‌های حائز حساسیت و ویژگی قابل قبول، از اهمیت بالایی برخوردار است. مطالعۀ حاضر به منظور طراحی و بهینه‌سازی سیستم الایزای نقطه‌ای (Dot-blot ELISA) با آنتی‌ژن‌های اختصاصی جهت تشخیص ساده و سریع مشمشه در نمونه‌های سرمی اسب‌سانان انجام گرفت. مواد و روش‌ها سویه‌های بورخولدریا مالئی در محیط مایع نوترینت همراه با گلیسیرول 4 درصد کشت داده شدند. آنتی‌ژن‌های کل سلول باکتری با استفاده از روش سونیکاسیون و ترسیب با تری‌کلرو استیک اسید (TCA) استخراج شد. غلظت بهینه آنتی‌ژن-آنتی‌بادی با روش تیتراسیون چکر بورد معین شد. آنتی‌ژن باکتری روی کاغذ نیتروسلولز مفروش و بعد از متوقف‌سازی با شیرخشک، سرم حیوان مشکوک و سپس آنتی‌بادی کونژوگه شده با HRP اضافه گردید و با استفاده از سوبسترای TMB، سیگنال‌ها رهگیری شد. یافته‌ها تعداد 4 نمونه از 90 نمونۀ سرم با استفاده از آزمون الایزای نقطه‌ای، مثبت گزارش شد. ویژگی و حساسیت آزمون، به‌ترتیب 96/62 و 100 درصد برآورد گردید. کشت و جداسازی بورخولدریا مالئی از نمونه‌های بالینی حیوان، اعتبار تست را تایید کرد. نتیجه‌گیری یافته‌ها نشان داد روش الایزای نقطه‌ای حائز حساسیت، ویژگی و دقت بالا در تشخیص مشمشه بوده و به دلیل سرعت، سهولت تفسیر بدون نیاز به ابزار خاص، مقرون به‌صرفه بودن و قابلیت کاربردی صحرایی آن، روش کاربردی و کارآمد می‌باشد.کلیدواژه ها
Burkholderia mallei, glanders, Dot-blot ELISA, antibody, بورخولدریا مالئی, مشمشه, الایزای نقطه‌ای, آنتیبادیاطلاعات بیشتر در مورد COI
COI مخفف عبارت CIVILICA Object Identifier به معنی شناسه سیویلیکا برای اسناد است. COI کدی است که مطابق محل انتشار، به مقالات کنفرانسها و ژورنالهای داخل کشور به هنگام نمایه سازی بر روی پایگاه استنادی سیویلیکا اختصاص می یابد.
کد COI به مفهوم کد ملی اسناد نمایه شده در سیویلیکا است و کدی یکتا و ثابت است و به همین دلیل همواره قابلیت استناد و پیگیری دارد.