ارزیابی روش الایزا جهت اندازه گیری آفلاتوکسین M1 در شیر به منظور تهیه کیت - فاز اول (تهیه آفلاتوکسین کانژوگه)
- سال انتشار: 1390
- محل انتشار: سازمان تحقیقات، آموزش و ترویج کشاورزی
- کد COI اختصاصی: R-1059418
- زبان مقاله: فارسی
- تعداد مشاهده: 582
نویسندگان
چکیده
چکیده تشخیص آفلاتوکسین ها به روش الایزا که از دقیق ترین روشها برای اندازه گیری این نوع سموم می باشد نیازمند تهیه مشتقات آفلاتوکسین با پروتیین است. در این مطالعه آفلاتوکسینM1 به آلبومین گاویBSA))متصل و کونژوگه آن تهیه گردید. سپس آنتی بادی ضد این کونژوگه در خرگوش تهیه شد. برای تهیه کونژوگه آفلاتوکسینM1 با آلبومین گاوی ابتدا آفلاتوکسین M1 در یک شرایط ملایم در مخلوطی از حلالهای پیریدین-متانول- آب در حضورO- کربوکسی متیل هیدروکسیل آمین همی هیدروکلراید برای تولید یک محصول واکنش پذیر با پروتیین ها که دارای یک گروه کربوکسیل آزاد می باشد واکنش داده شد. محصول بدست آمده (آفلاتوکسین-O-M1 کربوکسی متیل اکسیم) بعد از تبخیر کردن حلال، در حضور یک کربودی ایمید (ADC) به BSA وصل شد. اتصال آفلاتوکسینM1 به O کربوکسی متیل هیدروکسیل آمین همی هیدروکلراید با استفاده از کروماتوگرافی لایه نازک (TLC) روی پلیت سلیکاژل و همچنین با استفاده از کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا تجزیه و تحلیل شد. اتصال آفلاتوکسین-O-M1کربوکسی متیل اکسیم به آلبومین گاوی نیز با اسپکتروفتومتری UV-VHSبررسی شد. نتایج حاصل از این روش نشان داد که به هر مولکول BSA تقریبا 12مولکول آفلاتوکسین M1متصل شده است. به منظور تولید آنتی بادی پلی کلونال علیه آفلاتوکسین M1،کونژوگه AFM1-BSAبه خرگوش تزریق شد و تیتر آنتی بادی حاصله با استفاده از الایزای غیر مستقیم تعیین شد. نتایج الایزا نشان داد که بعد از تزریق چهارم تیتر آنتی بادی مناسب است. آنتی بادی حاصله با استفاده از رسوب سولفات آمونیوم وکروماتوگرافی تعویض آنیون تخلیص شد. سپس آنتی بادی ضد BSA با استفاده از کروماتوگرافی تمایلی دارای لیگاند BSA از آنتی بادی علیه آفلاتوکسینM1 تفکیک گردید. در نهایت با استفاده از آنتی بادی حاصله روشی از الایزا برای اندازه گیری آفلاتوکسینM1 مورد بررسی قرارگرفت. واژه های کلیدی:آفلاتوکسین M1،آلبومین گاوی،کونژوگه،الایزا، شیرکلیدواژه ها
اطلاعات بیشتر در مورد COI
COI مخفف عبارت CIVILICA Object Identifier به معنی شناسه سیویلیکا برای اسناد است. COI کدی است که مطابق محل انتشار، به مقالات کنفرانسها و ژورنالهای داخل کشور به هنگام نمایه سازی بر روی پایگاه استنادی سیویلیکا اختصاص می یابد.
کد COI به مفهوم کد ملی اسناد نمایه شده در سیویلیکا است و کدی یکتا و ثابت است و به همین دلیل همواره قابلیت استناد و پیگیری دارد.