تولید نانو بیوسنسور اختصاصی بر علیه ویروس تریستزای مرکبات

بیماری تریستزای مرکبات یکی از مخرب ترین بیماری های مرکبات در مناطق شمالی و جنوبی کشور به شمار می رود. این بیماری توسط Citrus tristeza virus ایجاد می شود. روش های مرسوم در شناسایی این بیماری در باغات آلوده شامل انواع روش های مولکولی وسرولوژیک می باشد. وجود محدودیت های فراوان در کاربرد این روش ها سبب گردیده تا مراحل تایید سلامت نهال و غربال گری باغات مشکوک به آلودگی با مشکلات زیادی همراه گردد. هدف از اجرای پروژه حاضر استفاده از نانوذرات برای افزایش حساسیت و دقت روش های شناسایی ویروس تریستزا در درختان آلوده است. تولید نانوبیوسنسور مورد نظر بر اساس خاصیت Förster resonance energy transfer (FRET) می باشد که در اینجا ذرات نانوبیوسنسور کوانتوم دات به مولکول های آنتی بادی متصل گردیده و از ردامین برای اتصال به پروتیین پوششی نوترکیب خالص جهت خاموش نمودن خاصیت فلورسانس کوانتوم دات استفاده گردید. در این تحقیق از سازه بیانی باکتریایی حاوی ژن پروتیین پوششی برای تولید انبوه پروتیین آنتی ژن استفاده گردید. خالص سازی بر مبنای کروماتوگرافی صورت پذیرفته و کمیت و کیفیت پروتیین حاصله سنجیده گردید. پروتیین پوششی خالص برای اتصال به ذرات ردامین استفاده گردید. خالص سازی گاماگلوبولین از سرم خون اختصاصی تهیه شده بر علیه ویروس تریستزا با استفاده از ستون پروتیین آ انجام گرفت. پس از ارزیابی کمی و کیفی گاماگلوبولین خالص، از آن برای اتصال به ذرات کوانتوم دات استفاده گردید. . در این سیستم زمانیکه نمونه مورد آزمایش آلوده به ویروس باشد، پارتیکل های ویروسی موجود در نمونه های آلوده، جایگزین پروتیین پوششی نوترکیب کانژوگه شده با رودامین شده و نهایتا مقدار جذب کاهش یافت در حالیکه نمونه سالم تغییری در جذب ایجاد ننمود. در این سیستم استفاده از نانوذرات کوانتوم دات-آنتی بادی به تنهایی و همچنین مخلوط کوانتوم دات-آنتی بادی و آنتی ژن-ردامین توانست برای تشخیص نمونه های آلوده مورد استفاده قرار گرفت. در حالت اول افزودن نمونه گیاهی آلوده منجر به افزایش شدت نور ساطع شده از کوانتوم دات گردید ولی در حالت دوم افزودن نمونه گیاهی آلوده منجر به کاهش آن شد. نتایج استفاده از کیت فوق جهت شناسایی بیماری تریستزا در نمونه های گیاهی آلوده، حاکی از قابلیت بالای آن درتشخیص وجود آلودگی در گیاهان آلوده در حداقل زمان ممکن می باشد. لغات کلیدی: نانوبیوسنسور، FRET، CTV، بیماری تریستزای مرکبات ، کیت تشخیصی