جداسازی و شناسایی باکتری های با پتانسیل پروبیوتیک در سیستم گوارش مرغ های بومی

در حال حاضر با توجه به اهمیت بسیار بالای تغذیه ای و بهداشتی پروببوتبک ها، جداسازی، شناسایی و تولید این میکروارگانیسم های مفید با خصوصیات جدید پروبیوتیکی از منابع و زیست گاه های طبیعی مختلف برای افزایش سلامت در انسان، دام و طیور و حتی آبزیان اهمیت بسیار ویژه ای پیدا کرده اند. با توجه به اینکه مرغ های نژاد بومی دارای قابلیت تحمل بسیار بالایی به تنش های زیستی و غیر زیستی از جمله بیماری های های گوارشی و عفونی بدلیل تنوع ژنتیکی قوی و وجود فلور میکروبی موثر و مفید در سیستم گوارش آن ها است، لذا هدف از اجرای تحقیق حاضر، جداسازی و شناسایی باکتری اسید لاکتیک با پتانسیل پروبیوتیکی بالا از سیستم گوارش مرغ های بومی کشور بود. در این راستا، حدود ‮‭500‬ جدایه باکتری های اسیدلاکتیک از محتویات ایلیوم مرغ های بومی نژاد اصفهان، ارومیه و مازندران با استفاده از سه نوع محیط کشت غربالگری شامل محیط کشت مایع ‭MRS MRS ‬اسیدی و ‭MRS ‬اسیدی حاوی پپسین جداسازی شد. سپس به منظور غربال کردن باکتری هایی با بالاترین فعالیت پروبیوتیکی، آنالیزهای بیوشیمیایی بر روی باسیل های گرم مثبت و کاتالاز منفی صورت پذیرفت. این آزمون ها شامل مقاومت به شرایط اسیدی (‮‭5.2‬ ‭pH) ‬و نمک های صفراوی بود. سویه های منتخب در شرایط اسیدی و نمک صفراوی دارای قابلیت رشد برابر یا بالاتر از %‮‭70‬ نسبت به شرایط نرمال را داشتند. با توجه به نوع و تعداد سویه های منتخب بدست آمده از محیطهای غربالگری اولیه، مشخص شد که بکارگیری دو تیمار اسیدی و اسید-پپسین در ابتدای فرآیند غربال کردن می تواند یک روش مستقیم برای جداسازی لاکتوباسیل های پروبیوتیک باشد. در مرحله غربال سازی اولیه این پروژه و پروژه دوم، تعداد ‮‭45‬ جدایه به عنوان باکتری های با پتانسیل پربیوتیکی انتخاب شدند .جدایه های منتخب از طریق تکثیر اختصاصی ژن ‮‭16‬‭SrDNA ‬به کمک آغازگرهای ‭PAF ‬و‭PAR ‬و توالی یابی وآنالیز بیوانفورماتیکی توالی های بدست آمده، شناسایی شدند. مقایسه و صف بندی توالی های بدست آمده با استفاده از نرم افزارهای بیوانفورماتیک ‭Chromas‬، ‭BLAST‬،‭BioEdit‬، ‭Clustal W ‬انجام گرفت و توالی ها در بانک ژن ‭(NCBI) ‬ثبت شدند. نتایج بررسی های مولکولی نشان داد که جدایه های بدست آمده متعلق به هفت گونه ‭L. agilis‬، ‭L. crispatus‬، ‭L. fermentum‬، ‭L. oris‬، ‭L. reuteri‬، ‭L. salivarius‬، ‭L. vaginalis ‬می باشند. همچنین بررسی متاژنومیکی با استفاده از الکتروفورز دناتوره کننده شیب دار ‭(DGGE) ‬نشان داد فلور میکروبی سیستم هاضمه مرغ های بومی تنوع زیادی داشت. در پروژه بعدی آزمایش های تکمیلی پتانسیل پروبیوتیکی باکتری های جدا شده بررسی خواهد شد. واژگان کلیدی: مرغ نژاد بومی، پروبیوتیک، لاکتوباسیلوس، متاژنومیکس، شناسایی مولکولی، .‮‭16‬‭SrDNA