کلون سازی و بررسی بیان ژن nlpD اسینتوباکتر بومانی در سلولهای HDF انسان به روش RT-PCR

سال انتشار: 1396
نوع سند: مقاله ژورنالی
زبان: فارسی
مشاهده: 413

فایل این مقاله در 8 صفحه با فرمت PDF قابل دریافت می باشد

استخراج به نرم افزارهای پژوهشی:

لینک ثابت به این مقاله:

شناسه ملی سند علمی:

JR_FEYZ-21-4_008

تاریخ نمایه سازی: 29 مهر 1398

چکیده مقاله:

سابقه و هدف: اسینتوباکتر بومانی یکی از باکتری های بسیار مقاوم در برابر انواع آنتیب یوتیک ها در جهان است. این باکتری عاملعفونت های بیمارستانی به صورت بومی یا همه گیر بوده و هنوز واکسن موثری علیه آن وجود ندارد NlpD یکی از عوامل آنتی ژنی مهم است که سبب تحریک سیستم ایمنی میزبان می گردد. بنابراین، هدف از این تحقیق، کلون سازی و بررسی بیان ژن nlpD باکتری اسینتوباکتر بومانی در سلول های Human dermal fibroblast) HDF) است. مواد و روشها: در این تحقیق تجربی ژن nlpD از روی ژنوم اسینتوباکتر بومانی با استفاده از روش PCR تکثیر شد. سپس، ژن مذکور به ترتیب در ناقل های pTZ57R/T و pIRES2-EGFP کلون سازی و سابکلون گردید. تایید صحت کلون سازی ژن با سه روش PCR آنزیم های برش دهنده و تعیین توالی مورد ارزیابی قرار گرفت. سپس، ناقل نوترکیب نهایی pIRES2-EGFP-nlpD با کمک الکتروپوریشن به سلول های HDF منتقل گردید و بیان ژن هدف در این سلولها با روش RT-PCR بررسی شد.نتایج: قطعه 832 جفت بازی مربوط به ژن nlpD اسینتوباکتر بومانی با موفقیت تکثیر شد. همچنین، نتایج تحقیق نشان داد که سازواره نهایی pIRES2-EGFP-nlpD تشکیل گریده است. مشاهده باند 831 جفت بازی پس از انجام RT-PCR در سلول های ترانسفورم شده نسبت به سلولهای شاهد، موید بیان ژن nlpD در سلول های HDF می باشد.نتیجه گیری: سازواره نهایی ساخته شده در این تحقیق توان بیان ژن nlpD اسینتوباکتر بومانی را در سلولهای یوکاریوتی دارد. بیان موفق ژن هدف میتواند در راستای بررسی ایمنی زایی در حیوانات آزمایشگاهی به عنوان یک واکسن نوترکیب مدنظر قرار گیرد. هم چنین، سازواره pIRES2-EGFP-nlpD از پتانسیل لازم برای بررسی به عنوان واکسن ژنی در تحقیقات آینده برخوردار است.

نویسندگان

رسول هاشم زهی

گروه ژنتیک مولکولی، واحد علوم و تحقیقات فارس، دانشگاه آزاد اسلامی،شیراز- گروه ژنتیک مولکولی، واحد مرودشت، دانشگاه آزاد اسلامی، مرودشت

عباس دوستی

گروه ژنتیک مولکولی، واحد مرودشت، دانشگاه آزاد اسلامی، مرودشت

محمد کارگر

مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی، واحد شهرکرد، دانشگاه آزاد اسلامی، شهرکرد

مجتبی جعفری نیا

گروه ژنتیک مولکولی، واحد مرودشت، دانشگاه آزاد اسلامی، مرودشت