بررسی اثر تیمار عصاره قارچ Ascochyta rabiei بر بیان موقت ژن گزارشگر GUS

بیان موقت مبتنی بر اگروباکتریوم به عنوان یک ابزار سریع و ارزانقیمت میتواند در آنالیز توالیهای تنظیمی و پروموتری مورداستفاده قرار گیرد. ارزیابی بیان یک توالی تنظیمی القائی در پاسخ به عامل محرک به کمک بیان موقت قابل آنالیز است. انتظار میرود در عصاره قارچهای بیمارگر تعدادی از مولکولها و پروتئینها حضور داشته باشند که قادر باشند علاوه بر القاء سیستمهای دفاعی در گیاه، روی بیان پروتئینهاو احتمالا تجزیه آنها تاثیر داشته باشند. این مطالعه با هدف بررسی اثر عصاره قارچ بر میزان بیان ژن گزارشگر GUS تحت کنترل یک پروموتر دائمی در مقایسه با شرایط کنترل، انجام شد. تراریختی اگروباکتریوم سویه GV3101 به ناقلpBI121 با روش ذوب و انجماد انجام شد و تائید کلنیهای تراریخت با روش کلنی PCR و با استفاده از آغازگرهایPSh3-F/R انجام شد. تائید بیان پروکاریوتی ژنGUS با قرار گرفتن سوسپانسیون باکتری حامل وکتور pBI121 در بافر هیستوشیمیایی GUS انجام شد در مرحله بعد بیان پروکاریوتی به همراه عصاره قارچ Ascochyta rabiei مورد تائید قرار گرفت. به منظور مقایسه بیان ناقلpBI121 در سلولهای گیاه توتون در شرایط آلوده سازی توسط عصاره قارچ A. rabiei و48 ساعت بعد از تزریق اگروباکتریوم حامل وکتورpBI121 به برگ گیاهان توتون گونه هایNicotiana tabacum var. Xanthi و Nicotiana benthamiana، گیاهان با عصاره قارچ A. rabiei اسپری شدند و بعد از گذشت 24 ساعت بررسی بیان صورت گرفت. بیان ژن گزارشگر در شرایط تیمار عصاره قارچ و عدم تیمار به صورت کیفی سنجش شد. نتایج نشان می دهد بیان ناقل pBI121 تحت تاثیر غلظتهای مختلف عصاره قارچ A. rabiei قرار نگرفته است. بر این اساس میتوان بررسی بیان ژن گزارشگر را در شرایط تیمار با عصاره قارچ مورداستفاده قرار داد. لذا این روش را میتوان در مطالعات آنالیز بیان پروموترهای القاء شونده در شرایط تیمار با عصاره قارچ A. rabiei مورداستفاده قرار داد.