تیپ بندی مولکولی ایزوله های بالینی کلبسیلا پنومونیه جدا شده از بیمارستان های همدان با روش تکثیر نواحی تکراری توافقی بین ژنی انتروباکتریال (ERIC-PCR)

زمینه و هدف: کلبسیلاپنومونیه یک باکتری گرم منفی از خانواده انتروباکتریاسیه است که به عنوان فلور نرمال در دستگاه گوارش یافت می گردد. بین گونه های مختلف این باکتری، کلبسیلا پنومونیه شایع ترین و مهم ترین گونه می باشد. این گونه یکی از مهم ترین علل عفونت های بیمارستانی از جمله پنومونی، سپسیس و عفونت های دستگاه ادراری است. تکثیر نواحی توافقی بین ژنی انتروباکتریال (ERIC-PCR) یک تکنیک قابل اعتماد و به صرفه برای تیپ بندی مولکولی باکتری های خانواده انتروباکتریاسیه است که میزان شباهت سویه ها را مشخص می کند. هدف از این مطالعه شناسایی قرابت ژنتیکی ایزوله های کلبسیلا پنومونیه به دست آمده از بیمارستان های شهر همدان با روش ERIC-PCRاست. مواد و روشها: مجموعا 86 نمونه به دست آمده از بیماران مراجعه کننده به بخش های مختلف بیمارستان های بعثت وسینای همدان ازمهرماه الی آذر ماه 1397 جمع آوری شدند. نمونه ها شامل نمونه ادرار %25، نمونه از تراشه % 53/85 ، نمونه خون% 8/30 و نمونه زخم %8/30 بودند. ابتدا ایزوله های کلبسیلا باروش های روتین آزمایشگاهی وتست های افتراقی بیوشیمیایی شناسایی وتایید شدند. پس از 24 ساعت انکوباسیون نمونه ها در دمای 37 درجه سانتی گراد ، DNAآنها با روش جوشاندن (Boiling) استخراج شد. سپس واکنش زنجیره ای پلیمراز (ERIC-PCR) با دستگاه ترموسایکلر (Thermocycler Biorad,Inc.USA) و با استفاده از تولی پرایمر(5,& SULPHU; ()):5 -ATG TAA GCT CCT GGG GAT TCAC-3 DQG (5): 5 -AAG TAA GTG ACT*** *7* $*& *3 (0H tabion, Germany)انجام شد. فراورده های PCR روی ژل آگاروز دو درصد (Sigma- Aldrich) تحت ولتاژ 70 برای یک ساعت قرار گرفتند. سپس الگوی باندها با استفاده از اشعه فرابنفش آشکار سازی و الگوهای به دست امده اریک((ERIC با استفاده از سیستم تحلیل گر هوشمند آنالیز شدند . (inslico.ehu.es ) پروفایل های اریک توسط روشDice مقایسه و با نرم افزار UPGMA دسته بندی شدند.یافته ها: در این مطالعه میزان قرابت ایزوله های کلبسیلا پنومونیه مورد بررسی قرار گرفت . 39 الگوی اریک (ERIC) بدست آمد که 17 مورد از الگوها بین ایزوله های مختلف مشابه بودند (Common type) و 22 الگو منحصر به فرد بودند((Unique type .نتیجه گیری: نتایج این مطالعه تنوع ژنتیکی بالایی را بین سویه های کلبسیلا پنومونیه نشان داد که بیانگر گسترش پلی کلونال ایزوله های این باکتری بین بیمارستان های شهر همدان است. این تنوع ژنتیکی درمان عفونت های کلبسیلا را با مشکل مواجهه می سازد چرا که احتمال وجود الگوهای مقاومتی گوناگون بین باکتری های بدست آمده از بیماران مختلف وجود دارد.

کلیدواژه ها:

کلبسیلا پنومونیه ، تیپ بندی مولکولی ، ERIC-PCR