بررسی آزمایش تیتراسیون فور برای شناسایی ژن های مربوط به متابولیسم آهن در باکتری آئروموناس سالمونیسیدا

هدف: توانایی استفاده از آهن میزبان برای رشد و بقای بیشتر باکتری های هوازی و بی هوازی اختیاری حیاتی است . این فلز به عنوان یک کوفاکتور در فرآیند های متابولیکی مهم و کلیدی به کار می رود و در بیماری زایی برخی باکتری ها نقش دارد. یکی از مکانیسم های مهم کسب آهن در باکتری ها بیوسنتز سیدروفر می باشد. بیان بسیاری از ژن های در ارتباط با متابولیسم آهن به وسیله پروتئین فور تنظیم می شود. هدف از این مطالعه استفاده از آزمایش سنجش فور (FURTA) جهت شناسایی ژن های مربوط به متابولیسم آهن در باکتری بیماری زای ماهی آئروموناس سالمونیسیدا بود. مواد و روش کار: از باکتری آئروموناس سالمونیسیدا DNA توتال جدا گردید و پس از برش با آنزیم SAU3AI به پلاسمید 7-pT7 کلون گردید. این پلاسمید به وسیله تراریزش به اشریشیا کلی DH5a وارد گردید و پس از 16 ساعت انکوباسیون در دمای 37 درجه پلاسمید استخراج و به باکتری اشریشیا کلی H1717 واجد LacZ ، تراریزش گردید. این باکتری در محیط مکانکی آگار واجد 0/04 میلی مولار 3(SO4)Fe2 و آمپی سیلین کشت گردید. از پرگنه های قرمز (مثبت ) پلاسمید استخراج و توالی نوکلئوتیدهای DNA به دست آمد و با استفاده از اینترنت (BLAST) با نوکلئوتید سایر باکتری ها مقایسه گردید. نتایج و بحث : با استفاده از آزمایش سنجش فور (FURTA) و انجام توالی نوکلئوتیدهای DNA)sequencing DNA ) برخی از پرگنه های مثبت ، یک دسته از ژن های بیوسنتز سیدروفر شامل 6 ژن asbG, asbF, asbD, asbC, asbB, asbI به دست آمد. مقایسه این ژن ها با سایر ژن های موجود در داده های بلاست نشان داد که این ژن ها شباهت زیادی با ژن های بیوسنتز سیدروفر در سایر باکتری ها از جمله آسینتوباکتر بومانی و ویبریو کلرا دارد وتوالی 19 نوکلئوتید جعبه فور (FUR box ) موجود در ناحیه پروموتور برخی از این ژن ها (asbD وasbB ) شباهت نزدیکی با جعبه فور در باکتری اشریشیا کلی دارد که نشان از تنظیم این ژن ها توسط پروتئین سرکوب کننده فور می باشد. آزمایش سنجش فور یک روش بسیار مناسب برای جداسازی ژن های در ارتباط با متابولیسم آهن در باکتری هاست اگرچه گاهی ژن هایی که در ظاهر نقش مهمی در متابولیسم آهن ندارند هم توسط پروتئین فور تنظیم می گردند.

کلیدواژه ها:

آئروموناس سالمونیسیدا ، فور ، سیدروفر