تعیین آنتی ژنیستی آلفاتوکسین خالص سازی شده کلستریدیوم سپتیکوم

هدف: هدف از این تحقیق طراحی روشی موثر و کم هزینه برای تولید و تخلیص آنتی بادی پلی کلونال برعلیه آلفاتوکسین کلستریدیم سپتیکوم (Clostridium septicum) می باشد که در امر تشخیص بیماری های مشکوک به عفونت با کلستریدیم سپتیکوم کاربرد دارد، علاوه بر این می توان از آن در خالص سازی مقادیر بیشتر آلفاتوکسین استفاده کرد. مواد و روش کار: جهت تولید آنتی بادی از خرگوش به عنوان میزبان استفاده شد. پس از ایمونیزاسیون خرگوش با آلفاتوکسین به همراه ادجوانت ، سرم آن ها جداسازی گردید. جهت تشخیص آنتی بادی تولیدشده در حیوان از دو روشDID وSRID استفاده شد. پس از اطمینان از وجود آنتی آلفاتوکسین در سرم، توسط سه مرحله تخلیص یعنی سولفات آمونیوم اشباع، کروماتوگرافی تعویض یونی و ژل فیلتراسیون ملکول IgG جداسازی وتخلیص گردید. جهت ارزیابی میزان خلوص آنتی بادی از تکنیک SDS-PAGE استفاده شد. در نهایت جهت اطمینان از عدم وجود باند های غیر اختصاصی از تکنیک وسترن بلات استفاده شد. نتایج و بحث : نتایج تست های سرولوژیک حاکی از تولید آنتی بادی در خرگوش بود. شایان ذکر است که خالص سازی اولیه و مقدماتی سرم حاوی آنتی آلفاتوکسین از طریق رسوبدهی با سولفات آمونیوم 50 درصد و دیالیز فراکسیون نمکی در برابر PBS کمک قابل توجهی به حذف ناخالصی های عمده، پیش از انجام خالص سازی های اصلی روی ستون تبادل یونی و فیلتراسیون ژلی نمود. استفاده از تکنیک SDS-PAG نشان داد که با استفاده از سه مرحله تخلیص مذکور می توان آنتی بادی IgG با خلوص بالا به دست آورد. با ایجاد رنگ در محل باند 47 کیلو دالتون و عدم ایجاد باندهای رنگی در بقیه قسمت های غشای نیتروسلولز در تکنیک وسترن بلات می توان به این نتیجه رسید که آنتی بادی تولید شده فقط با آلفاتوکسین واکنش داده و با سایر پروتئین های نمونه واکنش غیر اختصاصی ایجاد نمی کند. .

کلیدواژه ها:

کلستریدیوم سپتیکوم ، آلفاتوکسین ، آنتی آلفاتوکسین ، ادجوانت ، خالص سازی