جدا سازی و همسانه سازی ژن منگنزپراکسیداز (mnp) از قارچ صدفی خوراکی

در قارچ صدفی خوراکی (Pleurotus ostreatus) آنزیم های مختلفی از ابتدای رشد میسلیومی تا انتهای دوره ی میوه دهی، تجزیه ترکیبات لیگنینی را در محیط کشت بر عهده دارند. چوب، بقایای گیاهی و بیشتر ضایعات گیاهی دیگر در طبیعت تحت عنوان ترکیبات لیگنوسلولزی نامیده می شوند. لیگنوسلولز عمدتا از سلولز، همی سلولز و لیگنین تشکیل می شود. آنزیم منگنزپراکسیداز (EC:1:11:1:13)، یکی از عمومی ترین پراکسیدازهای تخریب کننده لیگنین است که توسط اکثر قارچ های تجزیه کننده چوب و نیز بسیاری از قارچ های تجزیه کننده کمپوست تولید می شود. در این پژوهش به منظور جداسازی cDNA­ی ژن mnp قارچ صدفی خوراکی (P. ostreatus var. florida)، استخراج  RNAو سپس سنتز cDNA انجام و بر اساس توالی ژن mnp و با استفاده از نرم افزار Primer Premier (V. 5.0) آغازگرها طراحی گردید و با واکنش زنجیره­ای پلیمراز تکثیر شد. قطعه تکثیر شده در ناقل PTG19-T وارد شد و با استفاده از توالی یابی تایید شد. در ادامه، ژن mnp در ناقل p13H88 همسانه سازی گردید. سپس با روش یخ-ذوب به Ecoli (سویه یDH5α ) منتقل و تایید حضور آن در باکتری با روش هضم آنزیمی انجام گرفت. نتایج نشان داد که ژن mnp در ناقل p13H88 همسانه سازی شده است. پلاسمید نوترکیب بدست آمده با نام p13H88-FM نامگذاری شد.

کلیدواژه ها:

تجزیه لیگنین ، ناقل ، لیگنوسلولز ، منگنزپراکسیداز