تهیه کشت سلولی پرایمری زنبور عسل (Apis mellifera) به روش های هضم آنزیمی Planting

کشت سلولی پرایمری در تحقیقات تشخیص بیماریهای ویروسی کاربرد فراوانی دارد. در مورد گونه هایی از جانداران نظیر زنبور عسل که تاکنون تیره سلولی از آنها تهیه نشده است کشت سلولی پرایمری اهمیت ویژه ای دارد. بطور کلی تحقیقات در این زمینه بسیار محدود بیشتر بر روی سایر حشرات می باشد. این تحقیق اولین مطالعه در زمینه تهیه کشت سلولی زنبور عسل در ایران می باشد. از آنجاییکه گزارشاتی از تشخیص بیماریهای ویروسی مهم زنبور عسل در ایران وجود دارد، این تحقیق امکان جداسازی ویروسهای مورد نظر زمینه مناسب را برای تهیه سلول های لاین این حشره سودمند در کشور فراهم می سازد. در این تحقیق از سنین مختلف مراحل لاروی شفیرگی زنبور عسل نمونه هایی تهیه پس از ضد عفونی با روش های مناسب، کشت پرایمری با روش های هضم آنزیمی شامل تریپسینه کردن کوتاه مدت طولانی مدت بدون هضم آنزیم با روشPlanting Minced Tissue تهیه گردید. سلولهای بدست آمده در روش هضم آنزیمی با استفاده از محیط Grac Insect Medium غنی شده با FBS در درجه حرارت مناسب قرارگرفته پس از رشد رسیدن به سطح پوششی کامل، از آنها پاساژ تهیه این کار با دادن پاساژهای مکرر ادامه یافت. در روش Planting قطعات کوچکی از بافت های مختلف در داخل فلاسک کشت سلول در فواصل معین قرار داده (کاشته) پس ازچسبندگی کامل، محیط کشت به آنها اضافه گردید. در روش های هضم آنزیمی تعداد قابل ملاحظه ایی سلول، تکثیر یافته که چندین پاساژ متوالی از آنها تهیه گردید. در روش Planting میزان قابل توجهی سلول از لبه های بافت های کاشته شده در سطح فلاسک رشدیافت که پس از کندن قطعات اولیه بافتی تعویض محیط، سلولها به روند رشد خود ادامه داده پس از رسیدن به سطح پوششی کامل از آنها پاساژ تهیه گردید. بهترین نتایج از از بافتهای مختلف شفیره روش Planting بدست آمد.

کلیدواژه ها:

کشت سلول ، پرایمری ، زنبور عسل