جداسازی، کلونینگ و بررسی بیان گلیکوپروتیین ویروس سپتی سمی خونریزی دهنده ویروسی VHSV در باکتری اشرشیاکلی

گلیکوپروتیین ویروس VHSV که مولد بیماری سپتی سمی خونریزی دهنده ویروسی در ماهی قزل آلا است، پروتیینی ازویروس می باشد که موجب القای پاسخ ایمنی مناسب در ماهی می شود. لذا این مطالعه، با هدف همسانه سازی و بیان ژن گلیکوپروتیین غشایی ویروس VHSV در باکتری E.coli جهت تولید پایدار پروتیین فعال انجام شد. توالی کدکننده ژن G ویروس VHSV پس از تکثیر با پرایمر های اختصاصی، با استفاده از آنزیم های برشی BamHI و XhoI در ناقل بیانی pET-28a(+) تحت کنترل پروموتر T7 همسانه سازی شد و سپس به باکتری اشرشی اکلی سویه Rosetta و Shuffle T7 انتقال یافت و در ادامه بیان پروتیین مورد بررسی قرار گرفت. همسانه سازی ژن G در ناقل بیانی pET-28a(+) با استفاده از Clony PCR ، غربال گری سریع و هضم آنزیمی تایید شد. هم چنین صحت توالی و جهت همسانه سازی از طریق تعیین توالی ژن G مورد بررسی قرار گرفت. اما در هیچکدام از سویه های باکتری اشرشی اکلی ) Rosetta و Shuffle T7 (، گلیکوپروتیین نوترکیب تولید نگردید. این امر می تواند به دلیل تخریب سریع پروتیین توسط پروتیازهای میزبان به دلیل ماهیت سمی پروتیین های غشایی نوترکیب باشد. حذف بخش های آبگریز غشایی از پروتیین، تغییر شرایط کشت و استفاده از شریک های الحاقی می تواند به عنوان راهکار های احتمالی برای تولید پایدار این پروتیین در سیستم بیانی باکتری مورد بررسی قرار گیرد.

کلیدواژه ها:

ویروس سپتی سمی خونریز ی دهنده ویروسی ، گلیکوپروتیین ، همسانه سازی ، pET-28a ، اشرشیا کلی