بهینه سازی استخراج هورمون رشد نوترکیب انسانی

هورمون رشد انسانی نوترکیب یک پروتیین شامل 191 آمینواسید با وزن مولکولی Kda 22 است. این هورمون برای رشد طولی ضروری است و در درمان رشد استخوان در کودکان مبتلا به کوتاهی قد و سایر بیماری های مربوط به کوتاهی قد از جمله کم کاری هیپوفیز و سندرم ترنر و نارسایی های مزمن کلیوی و بزرگسالان مبتلا به ایدز کاربرد دارد. دراین مطالعه هورمون رشد انسانی نوترکیب در E .coli در اغلب انکلوژن بادی ها بیان می شود. تخلیص این پروتیین بصورت مرحله به مرحله شامل موارد زیر انجام می شود. سلول های باکتریایی با استفاده از بافرهای لیزکننده با PH=8/5 و یک مرحله سونیکاسیون لیز می شوند. سپس انکلوژن بادی ها شستشو داده می شوند و در بافر فسفات با PH=12 حل می شوند. در مرحله سوم، پروتیین های حل شده در محلول حل کننده که تا حدودی به فرم بدون تاخوردگی هستند، باید بازتاخورده شوند زیرا که ممکن است غلظت بالای دناتورانت ها و pH قلیایی باعث به هم خوردن تاخوردگی پروتیین ها شود. این مرحله با اکسیداسیون آمینواسیدهای سیستیین موجود در پیوند های دیسولفید و کاهش pH محلول پروتیینی صورت گرفت. در نهایت پروتیین هورمون رشد بازتاخورده شده، با استفاده از کروماتوگرافی آنیونی DEAE و ژل فیلتراسیون خالص سازی نسبی شد. استفاده از این دو ستون سبب خلوص نسبتا خوب و با کیفیت پروتیین هورمون رشد انسانی بود؛ بطوریکه در ژل SDS- PAGE مشخص شد.

کلیدواژه ها:

هورمون رشد انسانی نوترکیب ، کروماتوگرافی تعویض آنیونی ، انکلوژن بادی