تولید چندین برابری انتی بیوتیک استرپتومایسین با وارد کردن یک پروموتور قوی قبل از کلاستر ژن مربوطه

؛CRISPR –CAS تکنیکی است که در آن یک اندونوکلیازتوسط یک gRNA به سمت ژن مورد نظر کشانده می شود و در آن برش ایجاد می کند. که در نهایت می تواند با مکانیسم های ترمیم مستعد خطا مثل NHEJ یا همراه با یک الیگونوکلیویید که القای مکانیسم HDR است ترمیم می شوند. در این مطالعه با استفاده از سیستم CRISPR-CAS تصمیم بر این گرفتیم که تولید آنتی بیوتیک از باکتری S.griseus را چندین برابر کنیم به این صورت که با استفاده از وکتور ساخته شده توسط zhao به نام pcrispomyces-2 نهایتا یک پرومتور قوی چون kas0p را در ابتدای کلاستر ژنی برای تولید آنتی بیوتیک استرپتومایسین که شامل ژن هایی چون strR1 و strB و ... است قرار داده و تولید این محصول را چندین برابر می کنیم. در این آزمایش تصمیم بر این شد که از وکتور pcrispomyces kas0p-2 (دارای پروموتر kas0p) استفاده شود. ابتدا با برش توسط آنزیم Bbs1 قطعه 20N طراحی شده برای ژن هدف را وارد وکتور کرده و سپس توسط برش آنزیم Spe1 ابتدا قطعه ی flanking سمت 3 پروموتور kas0p و سپس با برش آنزیم kas0p و سپس با برش آنزیم HindⅢFlanking سمت 5 پروموتر مربوطه را وارد وکتور کرده، نهایتا با وارد شدن این وکتور به باکتری S.griseus باعث بیان شدن سیستم CRISPR و برش قبل کلاستر ژنی انتی بیوتیک می شود. سپس با اتصال نواحی flanking باعث استفاده از مکانیسم HDR و نهایتا Knock in کردن پروموتر kas0p و تولید چند برابری محصول می شود. به طور خلاصه استفاده ی این سیستم به طور چشم گیری می تواند در جهت تولید محصولات در مقیاس بالا درصنعت وپزشکی کاربرد داشته باشد.

کلیدواژه ها:

آنتی بیوتیک ، سیستم کریسپر ، استرپتومایسین