مطالعه عوامل مهم موثر برروی انتقال ژن با آگروباکتریوم به گیاه گوجه فرنگی واریته -CALJN3

عوامل موثر بر روی انتقال ژن از طربق آگروباکنربوم به گیاه گوجه فرنگی واربته CAL-JN3 در این تحقیق مورد مطالعه قرار گرفت .ریز نمونه های کونیلدونی به دست آمده از گباه گوجه فرنگی 11 ‏روزه ی واریته CAL-JN3 که در درون شیشه ودر فیتوترون کشت شده بود با آگروباکتریوم تومورزا سوبهLBA4404 ‏حامل ناقل Pcambia 1304که حاوی ژن گزینشگر مقاوت به هیگرومابسین (ببان کننده هیگرومابسین فسفوترانسفراز) وژن پروانسولین انسانی هست تلقیح شد کارآبی انتفال 31 ‏% در شرابط ایده آل به دست آمد شرایط مطلوب انتقال ژن توسط آگروباکتریوم به واریتهCAL-JN3 که در این تحقیق بررسی وبهینه شدند عبارت بودند از:قرار گرفتن ریزنمونه های کوتیلدونی 11 ‏روزه در محیط کشت پیش تیمار شامل(MS1جامد+grL -1‏ 30 ساکارز +mg1 2ازهورمونTDZ2) به مدت 24 ‏- 48 ‏ساعت سپس آلودگی نمونه های کوتیلدونی باسوسپانببون آگروباکنربومی با OD 260= 1 به مدت 10 ‏دقیقه وبعد از خشک کردن نمونه ها ، به مدت 24 ‏ساعت در محیط هم کشتی مشابه محیط پیش تیمارقرارگرفنند وسپس به محیط کشت پبش اننخابی حاوی ( MSجامد+grL -1‏ 30 ساکارز + 2mgL -1 ‏هورمون+TDZ ‏سفوناکسیم) انتفال یافتند بهترین غلظت آنتی بیوتیک سفوتاکسیم گیاه 300 mgL -1 ‏روز تعیین شد مدت 4 ‏روز در این تیمار قرارگرفت. در مرحله بعدی نمونه ها به محیط کشت انتخابی انتقال یافتند که علاوه برترکیبات بالا حاوی آنتی بیوتیک هیگرومایسین برای جدا کردن گیاهان تراریخته احتمالی طی آزمایشی ٢۵ ‏میلی گرم بر لیتر تعیین شد. وجود ژن مقاومت وپروانسولین در گیاهان رشد یافته در محیط کشت انتخابی حاوی هیگرومایسین با PCR3 به اثبات رسید

کلیدواژه ها:

آکروباکتریوم تومور زا ، انتقال ژن ، گیاه تراریخته