جداسازی و کلونینگ ژن لاکتوفرین شتر عربی و بیان آن در گیاه توتون

امروزه؛ با پیشرفته ای که در زیست شناسی مولکولی، مهندسی ژنتیک و کشت بافت گیاهی به دست آمده؛ روش های جدید و کاراتری برای غلبه به محدودیت های به نژآدی گیاهی سنتی در ایجاد گیاهان مقاوم به بیماری بوجود آمده است. در این روش ها با بیان پروتئین های ضدمیکروبی در گیاهان ؛، می توان گیاهان مقاوم به بیماری تولید کرد. همچنین می توان این ترکیبات ضدمیکروبی تولید شده در گیاهان را خالص سازی کرده و به مصارف مختلف رساند. در این پژوهش CDS ژن لاکتوفرین از بافت پستانی شتر جداسازی شدو ابتدا در ناقل pTZ57R همسانه سازی شد. پس از جداسازی و تایید این توالی ژنی از ناقل pTZ57R برش و در ناقل بیانی pART27 تحت پروموتر35S دوگانه همسانه سازی گردید. سازه آماده شده با استفاده از الکتروپوریشن به اگروباکتریوم سویه C58 منتقل شد. سپس با استفاده از روش دیسک برگی به گیاه توتون منتقل گردید. گیاهان باززایی شده پس از تایید تراریختی بوسیله PCR ژنومیک، PCR رویcDNA و همچنین Real Time PCR برای آزمایش ضدمیکروبی بکاربرده شدند. پروتئین استخراج شده از گیاهان تراریخت درمحیط in vitro اثر بازدارندگی بر علیه بیمارگرهای جانوری و گیاهی نشان داد. نتایج آزمایش CFU نشان داد که لاکتوفرین تولیدی گیاهان تراریخت، اثر ممانعت کننده نسبتا بالایی روی این بیمارگرها داشته است.

کلیدواژه ها:

مهندسی ژنتیک ، ژن لاکتوفرین ، شتر عربی ، بیماری های گیاهی