طراحی و تولید رده سلولی بیان کننده ژن های 5'UTR و NS3 از عامل اسهال ویروسی گاوها (BVDV) به منظور ارزیابی کارایی روش های درمانی علیه این ویروس
محل انتشار: فصلنامه تحقیقات دامپزشکی، دوره: 69، شماره: 4
سال انتشار: 1393
نوع سند: مقاله ژورنالی
زبان: فارسی
مشاهده: 904
فایل این مقاله در 13 صفحه با فرمت PDF قابل دریافت می باشد
- صدور گواهی نمایه سازی
- من نویسنده این مقاله هستم
استخراج به نرم افزارهای پژوهشی:
شناسه ملی سند علمی:
JR_JVR-69-4_002
تاریخ نمایه سازی: 11 اردیبهشت 1394
چکیده مقاله:
زمینه مطالعه: عامل مولد اسهال ویروسی گاو (BVDV) عامل مضرات اقتصادی، بهداشتی قابل توجهی در مزارع پرورش گاو است. به دلیل ناکارآمدی نسبی برنامه های ریشه کنی این ویروس، در سال های اخیر برای مبارزه با آن تدابیر متعدد ضد ویروسی نظیر ژن درمانی به فراوانی به کار گرفته شده است. یکی از روش های ارزیابی کیفیت این تدابیر، استفاده از این ابزارها ضد ویروسی در ردههای سلولی اختصاصی بیان کننده آن زن از طریق القای بیان ژن توسط پلاسمید حامل یا عفونت باوکتورهای ویروسی است.هدف: اینمطالعه با هدف تهیه یک رده ی سلولی بسیار بیان کننده بخشی از ژنوم BVDV برای ارزیابی کارآمدی روش های درمانی و پیشگیرانه علیه این ویروس انجام شد. روش کار: بدین منظور پس از کشت سویه استاندارد NADL از BVDV و استخراج vRNA، افزوده سازی ژن های کد کننده 5’UTR و NS3 از ژنوم این ویروس و سپس کلونینگ این قطعات ژنی در پلاسمید لنتی ویروسی pWPI-linker B در فرادست ژن GFP انجام شد. پس از تأیید کلونینگ، لنتی وکتورهای حاوی BVDV-NS3 و BVDV-5’UTR در سلول های 293T با استفاده از سیستم packaging نسل سوم تولید شدند. در مرحله بعد سلول های MDBK بیان کننده دائمی 5’UTR و NS3 با استفاده از عفونت بالنتی ویروس های بیان کننده BVDV-NS3 و BVDV-5’UTR تولید گردیدند. نتایج: کارآمدی عفونت بالنتی و کتورهای حامل ترانس زن با آزمون های مشاهده مستقیم با میکروسکوپ فلورسنت، وسترن بلاتینگ و RT-PCR بررسی و با گروه کنترل مقایسه گردید و حضور و بیان ژن های مورد نظر تأیید شد. نتیجه گیری نهایی: نتایج نشان دهنده تولید موفقیت آمیز رده ی سلولی MDBK بسیار بیان کننده این دو زن از BVDV بود و لنتی وکتورها به دلیل بیان طولانی مدت و پایدار ژن تا چندین نسل سلولی و امکن عفونی نمودن بسیاری از رده های سلولی نسبت به سایر وکتورهای ویروسی ارجحیت دارند.
کلیدواژه ها:
نویسندگان
اعظم مختاری
گروه میکروبیولوژی و ایمونولوژی، دانشکده دامپزشکی دانشگاه تهران، تهران- ایران
محمد معصومی
گروه زیست فناوری دام و آبزیان، پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری ایران، تهران- ایران
محمدرضا محزونیه
گروه پاتوبیولوژی، دانشکده دامپزشکی دانشگاه شهرکرد، شهرکرد- ایران
آرش قلیانچی لنگرودی
گروه میکروبیولوژی و ایمونولوژی، دانشکده دامپزشکی دانشگاه تهران، تهران- ایران