امکان سنجی تولید واکسن نوترکیب کلستریدیائی از طریق بیان ژن توکسین اپسیلون کلستریدیوم پرفرینجنز تیپ D در E. Coli
- سال انتشار: 1393
- محل انتشار: اولین کنگره بین المللی و سیزدهمین کنگره ژنتیک ایران
- کد COI اختصاصی: CIGS13_0865
- زبان مقاله: فارسی
- تعداد مشاهده: 895
نویسندگان
بخش تحقیق و تولید واکسن های بی هوازی، موسسه تحقیقات واکسن وسرم سازی رازی
چکیده
باکتریClostridium perfringensیک باسیل گرم مثبت، بی هوازی، اسپورزا است. کلستریدیوم پرفرینجنز باکتری بیماریزای مهمی است که انسات و دام را مبتلا کرده و باعث ایجاد محدوده وسیعی از بیماری ها شامل اسهال، بیماری های نکروز دهنده بافتی و گازگانگرن در انسان و انتروتوکسمی کشنده در دام می گردد. این باکتری حداقل 15 نوع توکسین مختلف تولید می کند که در بیماریزائی آن نقش دارند. بر اساس تولید چهار توکسین مهم و اصلی آلفا، بتا، اپسیلون و یوتا در پنج گروهA ,B ,C ,D, Eقرارداده شده است. هدف: تولید توکسین اپسیلون کلستریدیوم پرفرینجنز تیپ Dبه روش نوترکیب. روش تحقیق: ژنوم باکتری کلستریدیوم پرفرینجنز تیپD تخلیص شده وژن کد کننده توکسین اپسیلون etx به وسیله آنزیم pfuتکثیر و در پلاسمید pJET1.2bluntلایگیت شد E.coli/TOP10با استفاده ازpJETεترانسفورم شد و غربالگری آن به روش مقاومت آنتی بیوتیکی وcolony PCRانجام شد. پلاسمید های نوترکیبpET22b(+) و pJETε با استفاده ازXhoI و NdeIبرش خورده و ژنetxو پلاسمید خطی شدهpET22b(+)تخلیص و به وسیله الکتروفورز ژل آگاروز ارزیابی شدند. ژنetxدرpET22b(+)لایگیت و بهE. coli/rosettaمنتقل شد. سلول های نوترکیب به روش مقاومت آنتی بیوتیکی وcolony PCRهویت یابی شدند. کلون های نوترکیب در محیط کشت حاوی آمپی سیلین در 37 درجه سانتیگراد تاOD600=0.6 کشت داده شدند. بیان توکسین اپسیلون با افزودنIPTG 0/5 mMالقاء گردید، برای تایید بیانSDS-PAGEوسترن بلاتینگ و تخلیص پروتئین با رزینNi-NTAانجام شد. نتیجه: با بررسی های بیان مشاهده گردید که بیان توکسین اپسیلون در کلون نوترکیبE. coli/rosetta/pETεبه خوبی صورت گرفته است. این تحقیق که برای اولین بار در ایران صورت پذیرفته است از نظر تهیه واکسن نوترکیب کاملا ضروری و با اهمیت استکلیدواژه ها
کلستریدیوم پرفرینجنز، توکسین اپسیلون، ژنetx ، کلونینگ، بیان، واکسن نوترکیبمقالات مرتبط جدید
اطلاعات بیشتر در مورد COI
COI مخفف عبارت CIVILICA Object Identifier به معنی شناسه سیویلیکا برای اسناد است. COI کدی است که مطابق محل انتشار، به مقالات کنفرانسها و ژورنالهای داخل کشور به هنگام نمایه سازی بر روی پایگاه استنادی سیویلیکا اختصاص می یابد.
کد COI به مفهوم کد ملی اسناد نمایه شده در سیویلیکا است و کدی یکتا و ثابت است و به همین دلیل همواره قابلیت استناد و پیگیری دارد.