همسانهسازی و بیان فاکتور رشد عصب انسانی نو ترکیب درE. Coli

فاکتور رشد عصب، نوروتروفینی است که اولین بار در دهه 1950 توسطStanley Cohen و Rita Levi-Montalcinکشف و خالصسازی شد، این فاکتور از سه زیر واحدγ وβ،αساخته شده و فعالیت نورونوتروفیک آن مربوط به زیر واحدBمیباشد که نسخهبرداری و ترجمه آن منجر به تولیدpreproproteinمی گردد که عملکرد زیستی آن رشد، بقا و تمایز سلولهای عصبی بوده و باعث گردیده در درمان بیماریهای حاصل از انحطاط سیستم عصبی مورد توجه قرار گیرد. مطالعه بیشتر این فاکتور نیازمند حضور منبع نسبتاً ارزانی از آن میباشد. توسعه مهندسی ژنتیک، تولید و بیان پروتئینهای هدف را به شکل نوترکیب با استفاده از میزبانهای بیانی مختلف امکانپذیر ساخته است. بنابراین در این پروژه همسانهسازی و بیان فاکتور رشد عصب انسانی نوترکیب درE. coliهدف قرار گرفت. ژن کدکننده بخش matureزیرواحدBفاکتور رشد عصب انسانی برای بیان درE. coliبهینهسازی و سنتز و در وکتور بیانیpET32aتحت کنترل پروموتور T7کلون و درE. coli BL21(DE3 بیان گردید. این سویه علاوه بر داشتن نقص درadenosine triphosphate (ATP)-dependent outer-membrane protease OmpT وprotease Lonدارای کپی کروموزومی ازRNA پلیمرازT7 تحت کنترل پروموتورlacUV5 برای بیان پروتئینهای نوترکیب تحت کنترل پروموتورT 7 است. به کمک هضم آنزیمی و سپس تعیین توالی صحت کاست بیانی تأیید گردیدنتایج حاصل از آنالیز وسترن بلات محصول نوترکیب نشان داد که پروتئین نوترکیب بیان شده به دو صورت محلول و نامحلول بوده که بخش بیشتر آن به صورت محلول میباشد.

کلیدواژه ها:

فاکتور رشد عصب ، همسانهسازی ، بیان پروتئین نوترکیب