سکینه کاظمی نورعینی - عضو هیات علمی گروه زیست شناسی دانشگاه حکیم سبزواری
لیلا مرادی جافری - دانشجوی کارشناسی ارشد دانشگاه حکیم سبزواری
اسکندر رستگار پویانی - عضو هیات علمی گروه زیست شناسی دانشگاه حکیم سبزواری

بررسی توالیهای قطعاتی ازDNAعلیرغم پرهزینه بودن در مطالعات فیلوژنتیکی مولکولی کاربرد وسیعی پیدا کرده است. اغلب برای شناسایی گونه های نزدیک به هم که از لحاظ مورفولوژی موارد ابهام وجود دارد بررسی توالیهای DNA و تبارشناخت آن تعیین کننده است. یک روش آسان و ارزان احتمالاً بررسی ویژگیهای بیوشیمی فیزیکی قطعه تکثیر شده DNAدر گونه های مورد بحث و مقایسه آن با یک الگوی از قبل شناخته شده و نه الزاماً تعیین توالی آن می باشد. برای محک زدن این ایده بر تفاوت در دمای ذوبTmمحصولاتPCRدر ژنهای پرکاربرد در مطالعات فیلوژنتیکی تمرکزنمودیم، این کمیت عمدتاً تحت تأثیر محتوای نوکلئوتیدی توالی می باشد. با افزودن رنگدانهSYBR Green Iبه محصولPCRژن16S rDNA از گونه های مختلف مارهای سمی که به لحاظ مورفولوژیکی به طور قطعی مورد تأیید قرار گرفته و روابط تبارشناختی مولکولی آنها نیز به موازات درحال انجام است، دمای ذوبTmآنها با استفاده از برنامه دمایی دستگاهReal-Time PCRاندازه گیری و با هم مقایسه شد. با وجود حفظ شدگی بالای ژن نتایج اولیه امیدوار کننده بوده، دامنه دماهای ذوب بین 84,2 تا 87.5 می باشد. گونه های نزدیک تر به هم اختلاف دمای ذوب کمتری را نشان می دهند ولی میانگین تکرارهای نمونه های هر گونه با در نظر گرفتن خطای استاندارد ناچیز آن قابلیت کاربرد این روش را مورد تأیید قرار می دهد. ترکیبی از دو یا سه ژن مختلف که انتظار می رود هریک دمای ذوب ویژه ای در هر گونه داشته باشد، بر دقت و حساسیت روش افزوده خواهد شد

فیلوژنی مولکولی، دمای ذوب