تولید گونهی تراریخت استرپتومایسس کلاولی جروس واجد ژن cas2 و بررسی افزایش تولید پادزیست در آن با روش بیواسی

زمینه و اهداف: استرپتومایسس کلاولیجروس تولیدکنندهی پادزیست کلاولانیک اسید است که بهطور گستردهای همراه با سایر پادزیستهای قوی و حساس به بتالاکتاماز استفاده میگردد. ژن cas2 دردسته ژنی کلاولانیک اسید قرارگرفته و در تنظیم بیوسنتز کلاولانیک اسید نقش دارد.مواد و روش کار: سازه )کانسترکت( نوترکیب pMTcas2 حاوی ژن cas2 از دانشگاه اصفهان تهیه گردید . با استفاده از روش لیز قلیایی پلاسمید نوترکیب از سویهی استرپتومایسس لیویدنس استخراج گردید.کانسترکت نوترکیب با استفاده از روش پلیاتیلن گلیکول به پروتوپلاستهای تهیهشده از باکتری استرپتومایسس کلاولیجروس ترانسفورم گردید. بهمنظور تأیید ترانسفورماسیون از روشهای استخراجپلاسمید و PCR با استفاده از پرایمر های اختصاصی cas2 استفاده شد. درنهایت بهمنظور بررسی نحوهیتأثیر ژن cas2 اضافهشده در تولید پادزیست از روش بیواسی استفاده گردید. یافتهها: ساختار پلاسمید نوترکیب پس از استخراج با روش هضم آنزیمی تأیید شد. پس از ترانسفورماسیون کلنیهای تک بر روی محیط بازیابی پروتوپلاست حاوی پادزیست اسپورهایخاکستریرنگ بر روی آن شکل گرفت. استخراج پلاسمید از سویهی ترانسفورم شده انجامشده و ترانسفورماسیون با انجام PCR تأیید گردید. مطالعات بیواسی نشان داد که حضور پلاسمید نوترکیب سبب4 برابری تولید کلاولانیک اسید در سویهی استرپتومایسس کلاولیجروس گردیده است. / افزایش 1 نتیجهگیری: با انجام روش بایواسی و تجزیهوتحلیل یافتهها مشخص شد که حضور پلاسمید نوترکیبواجد ژن cas2 سبب افزایش تولید کلاولانیک اسید در سویهی استرپتومایسس کلاولیجروس گردیده است. افزایش تولید کلاولانیک اسید میتواند گامی مؤثر در روند کاهش هزینههای تولید داروهای پرمصرف وابسته به آن گردد.

کلیدواژه ها:

استرپتومایسس کلاولیجروس ، کلاولانیک اسید ، بیواسی ، پلاسمید pMTcas2 ، ژن cas2