ردیابی دو ویروس موزاییک معمولی لوبیا و موزاییک نکروتیک معمولی لوبیا با استفاده از روش Immunocapture RT-PCR
- سال انتشار: 1391
- محل انتشار: نخستین همایش ملی تازه های سلولی مولکولی
- کد COI اختصاصی: NCNCMB01_090
- زبان مقاله: فارسی
- تعداد مشاهده: 935
نویسندگان
دانشکده کشاورزی ورامین-گروه گیاه پزشکی
دانشکده علوم زیستی، دانشگاه الزهرا(س) تهران
دانشکده علوم زیستی، دانشگاه الزهرا(س) تهران
دانشکده کشاورزی ورامین-گروه گیاهپزشکی
چکیده
عوامل ویروسی متعددی باعث بروز علایم موزا ییک و ایجاد خسارت در گیاه لوبیا چیتی ( Phaseolus vulgaris L.) میشوند. در بین این ویروسها ویروس موزا ییک معمولی لوبیا BCMV و ویروس موزا ییک نکروتیک لوبیا BCMNV از اهمیت ویژه ای برخوردار هستند . هدف: به منظور ردیابی دو ویروس BCMV و BCMNV از مناطق کشت لوبیا، در یک فصل زراعی نمونه هایی با علایم موزا ییک ، رگبرگ روشنی ، برگشتگی ، نکروتیک برگ و ساقه لوبیا جمع آوری گردید. روش ها: .در ابتدا نمونه ها با روشهای سرولوژیک DAS-ELISA و لکه گذاری بافتی ( Tissue-blot ) با آنتیسرمهای چند همسانه ای اختصاصی مورد سنجش و ردیابی قرار گرفتند. سپس جهت بررسی دقیق تر ، نمونه های آلوده با آزمون IC-RT-PCR مورد ارزیابی قرار گرفتند. در این آزمون ابتدا آنتی سرم اختصاصی ویروس های مورد نظر در بافر پوششی به نسبت 1:250 رقیق و در لوله های 0/ 5 میلی لیتری ریخته شد. این لوله ها به مدت 3 ساعت در انکوباتور با دمای 37 درجه سانتی گراد نگهداری گردید. سپس محتویات لوله ها تخلیه و لوله ها با بافر ( PBS-T ) شستشو داده شدند. در مرحله بعد برگ گیاهان آلوده با استفاده از بافر عصاره گیری به نسبت 1:10 (وزنی به حجمی) عصاره گیری شدند و 200 میکرولیتر از این عصاره ها به لوله ها اضافه گردید. لوله ها به مدت یک شب در یخچال نگهداری شدند. سپس مطابق مرحله قبل شسته و خشک شدند. پس از این مرحله مواد لازم برای ساخت cDNA به آنها اضافه شد. به منظور انجام واکنش RT-PCR دو جفت پرایمر اختصاصی برای منطقه ای از ژن پروتئین پوششی به کار گرفته شد که این پرایمر ها در BCMV قطعه ای به اندازه bp 373 و در BCMNV قطعه ای به اندازه bp 683 را تکثیر میکنند.این واکنش با کمک دستگاه ترموسایکلر با برنامه دمایی 3min 94.c و 35 چرخه شامل 72c70s ، 55c90s، 94c70s ، و در پایان در 72c10min ،صورت گرفت. یافته ها :محصول حاصل در ژل آگاروز 1 درصد الکتروفورز شد. بر اساس مقایسه سایز باند های ایجاد شده ، جدایه های ویروسی از لوبیای آلوده در مناطق اراک ، نیشابور ، زنجان ، کرج تفکیک گردید. بحث و نتیجه گیری: روش IC-RT-PCR نسبت به روش RT-PCR آسان تر و کم هزینه تر و دقیق تر است. در روش معمولی RT-PCR ابتدا بایستی RNA ویروس جداسازی شود و چون RNA پایداری کمتری نسبت به DNA دارد به راحتی توسط RNase از بین می رود.کلیدواژه ها
سرولوژی IC-RT-PCR لوبیامقالات مرتبط جدید
اطلاعات بیشتر در مورد COI
COI مخفف عبارت CIVILICA Object Identifier به معنی شناسه سیویلیکا برای اسناد است. COI کدی است که مطابق محل انتشار، به مقالات کنفرانسها و ژورنالهای داخل کشور به هنگام نمایه سازی بر روی پایگاه استنادی سیویلیکا اختصاص می یابد.
کد COI به مفهوم کد ملی اسناد نمایه شده در سیویلیکا است و کدی یکتا و ثابت است و به همین دلیل همواره قابلیت استناد و پیگیری دارد.