تخلیص آنزیم لیپواکسیژنازدانه کنجد با استفاده از کروماتوگرافی ژل فیلتراسیون و تعویض یونی

دانه کنجد منبع غنی از آنزیم لیپواکسیژناز (LOX) محسوب می شود. در این مطالعه، به جداسازی و تخلیص آنزیم لیپواکسیژناز از دانه کنجد پرداخته شد. آنزیم های تولید شده با استفاده از روش های رسوب دهی با سولفات آمونیوم، کروماتوگرافی ژل فیلتراسیون سفادکس G100 و کروماتوگرافی تعویض یونی Q- سفاروز خالص گردید. روند خالص سازی آنزیم با کمک ژل الکتروفورز SDS-PAGE بررسی شد. غلظت پروتئین فرکشن های خروجی از ستون کروماتوگرافی اندازه گیری شد و فعالیت آنزیمی نمونه های خالص شده بر پراکسیداسیون سوبسترای لینولئیک اسید در طول موج 660 نانومتر با استفاده متیل بلوسنجیده شد. فعالیت آنزیم لیپواکسیژناز در محدوده 9-3 pH اندازه گیری شد. بر اساس نتایج بدست آمده فرکشن 11 (0/3 مولار NaCl) دارای حداکثر فعالیت آنزیمی بود. وزن مولکولی آنزیم خالص شده بر اساس SDS-PAGE بیش از 70 کیلو دالتون برآورد گردید. آنالیز فعالیت آنزیم نشان داد که pH بهینه آنزیم 7 است. فعالیت آنزیم در محدوده pH های اسیدی و قلیایی کاهش یافته است همچنین، اثر یون دوظرفیتی آهن (Fe(2+) بر افزایش فعالیت آنزیم با توجه به کاهش جذب در طول موج 660 نانومتر مشاهده گردید، در حالیکه فعالیت آنزیم لیپواکسیژناز در حضور کاتیون آهن (Fe(3+) کاهش یافت.

کلیدواژه ها:

دانه کنجد ، آنزیم لیپواکسیژناز ، کروماتوگرافی ژل فیلتراسیون ، کروماتوگرافی تعویض یونی ، کاتیون آهن