تولید رده سلولی ناک اوت IDUA توسط تکنیک ویرایش ژنی CRISPR/Cas
- سال انتشار: 1399
- محل انتشار: مجله یافته، دوره: 22، شماره: 4
- کد COI اختصاصی: JR_YAFTE-22-4_014
- زبان مقاله: فارسی
- تعداد مشاهده: 60
نویسندگان
Department of Biology, Marvdasht Branch, Islamic Azad University, Marvdasht, Iran
Department of Basic Medical Sciences, Neyshabour University of Medical Sciences, Neyshabour, Iran.
Department of Biology, Marvdasht Branch, Islamic Azad University, Marvdasht, Iran
Department of Biology, Marvdasht Branch, Islamic Azad University, Marvdasht, Iran
Department of Medical Genetics, School of Medicine, Mashhad University of Medical Sciences, Mashhad, Iran
چکیده
مقدمه: موکوپلی ساکاریدوز تیپ (MPSI) I بیماری شایع ذخیره ای لیزوزومی است که به واسطه کمبود آنزیم آلفا-ال – ایدورونیداز (IDUA) بر روی کروموزوم ۴ (۴p۱۶.۳) ایجاد می گردد. این آنزیم در تجزیه گلیکوزآمینوگلیکانها یا موکوپلی ساکاریدهای درماتان سولفات و هپاران سولفات دخالت دارد و نقص در آنزیم مذکور منجر به افزایش سطح گلیکوز آمینو گلیکان ها (GAG) در خون و تجمع آن در اعضای مختلف بدن می شود. این ترکیبات پروتئوگلیکانی زیربنای ساختاری ماتریکس خارج سلولی و ساختار غضروفی نقاطی مثل مفاصل، دریچههای قلبی را فراهم مینماید؛ بعلاوه در تنظیم ارتباطات سلولی نقش دارد. در این مطالعه ما سیستم CRISPR/Cas را طراحی کردیم که ژن کد کننده انزیم IDUA را مورد هدف قرار داده است و ما توانستیم سلوهای ناک اوت این ژن را تولید کنیم. مواد و روش ها: ابتدا sgRNA هدف IUDA در پلاسمید px۳۳۵ کلون شد، با استفاده از نقشه برداری محدودکننده، پلاسمید نوترکیب تایید شد. سپس پلاسمید نوترکیب به رده سلولی اپیتلیال انسانی، HEK-۲۹۳ ترانسفکت شد. کلون های جهش یافته توسط آنالیز melting غربالگری شدند و جهش آنها با تعیین توالی سنگر مشخص شد. یافته ها: هضم آنزیمی و تعیین توالی سنگر، القای جهش ایندل را در دو کلون هتروزیگوت و یک کلون هموزیگوت تایید کرد. بحث و نتیجه گیری: در این مطالعه، ما با استفاده از سیستم CRISPR-Cas۹ یک مدل سلولی سندرم هورلر تولید کردیم که این مدل می تواند جهت استفاده در رویکرد های درمانی این بیماری استفاده شود.کلیدواژه ها
Hurler syndrome, CRISPR-Cas, Gene knock out, IDUA, سندرم هرلر, CRISPR-Cas, ژن ناک اوت, IDUAاطلاعات بیشتر در مورد COI
COI مخفف عبارت CIVILICA Object Identifier به معنی شناسه سیویلیکا برای اسناد است. COI کدی است که مطابق محل انتشار، به مقالات کنفرانسها و ژورنالهای داخل کشور به هنگام نمایه سازی بر روی پایگاه استنادی سیویلیکا اختصاص می یابد.
کد COI به مفهوم کد ملی اسناد نمایه شده در سیویلیکا است و کدی یکتا و ثابت است و به همین دلیل همواره قابلیت استناد و پیگیری دارد.