تاثیر لامینین و ماتریژل بر کلونی زایی سلول های بنیادی منجمد- ذوب شده اسپرماتوگونی در محیط آزمایشگاه

سابقه و هدف: سلول های بنیادی اسپرماتوگونی به عنوان سرمنشا فرایند اسپرماتوژنز تنها سلول های بنیادی بالغین هستند که علاوه بر تکثیر و خودنوزایی، قدرت انتقال اطلاعات ژنتیکی به نسل بعد را دارند. این سلول ها جایگاه مهمی در طب تولیدمثل، درمان انواع ناباروری و سرطان ها دارند. تکثیر این رده سلولی در محیط آزمایشگاه پیش نیاز تمامی مطالعات مربوط به آن است. هدف از مطالعه حاضر بررسی تاثیر ماتریکس خارج سلولی لامینین و ماتریژل بر القای کلونی زایی سلول های بنیادی اسپرماتوگونی منجمد- ذوب شده در محیط آزمایشگاه است. مواد و روش ها: سلول های بنیادی اسپرماتوگونی (SSCs) از بیضه بره جدا و به روش حذف تمایزی خالص سازی شدند. سپس بعد از انجماد و یخ گشایی در ۳ گروه آزمایشی شامل گروه شاهد (کشت ساده سلول ها در محیط پایه: DMEM حاوی ۱ درصد آنتی بیوتیک و ۵ درصد سرم گوساله جنین (FBS)، تیمار ۱ (کشت بر روی لامینین) و تیمار ۲ (کشت بر روی ماتریژل) به مدت ۱۰ روز کشت داده شدند. تعداد و مساحت کلونی ها در روزهای چهارم، هفتم و دهم در هر گروه محاسبه شد. نشانگرهای اختصاصی سلول های اسپرماتوگونی (plzf, ITGA۶, PGP۹.۵, VASA) نیز با آزمون ایمنوسیتوشیمی ارزیابی شدند. یافته ها: تعداد کلونی های تشکیل شده در گروه لامینین (۲/۶ ±۹۲/۱۱۸) به طور معنی داری بیشتر از گروه شاهد (۸/۳±۰۸/۷۸) و ماتریژل (۳/۴±۰۰/۹۵) است (۰۵/۰P≤). همچنین، مساحت کلونی در گروه لامینین (mm۲ ۳۰/۰±۳۷/۱) و ماتریژل (mm۲۳۸/۰±۹۷/۱) به طور معنی داری بیشتر از گروه شاهد (mm۲ ۰۸/۰±۵۹/۰) است (۰۵/۰P≤). نتیجه گیری: استفاده از ماتریکس برون سلولی لامینین در کشت سلول های اسپرماتوگونی در مقایسه با ماتریژل و کشت ساده به صورت معنی داری موجب افزایش قدرت کلونی زایی سلول های منجمد اسپرماتوگونی در محیط آزمایشگاه می شود.

کلیدواژه ها:

Cryopreservation ، Immunocytochemistry ، Laminin ، Matrigel ، Spermatogonia stem cells ، سلول های بنیادی اسپرماتوگونی ، لامینین ، ماتریژل ، انجماد ، ایمنوسیتوشیمی