سنجش کمی DNA میزبان در پروتئین نوترکیب فاکتور محرکه رشد گرانولوسیت تولید شده در E.coli

تشخیص و تعیین کمی مقادیر بسیار کم DNA در حوزه های مختلف با کاربرد بیولوژیکی حائز اهمیت می باشد. یکی از این حوزه ها تشخیص کمی بقایای DNA میزبان در پروتئین های دارویی نوترکیب است. این آلودگی بالقوه ممکن است در ایجاد واکنشهای حساسیت زا مؤثر بوده و یا DNA به داخل سلول ترانسفکت شده و باعث ایجاد تومور گردد. لذا بقایای DNA میزبان در پروتئینهای دارویی نوترکیب بعنوان یکی از آلودگیهای وابسته به میزبان تلقی می شود. مطابق الزامات مراجع ذیصلاح جهانی مانند ICH و WHO میزان بقایای DNA میزبان در بالک محصول نهایی بایستی کمتر از 100 پیکوگرم در هر دوز دارویی باشد. پروتئین نوترکیب فاکتور محرکه رشد گرانولوسیت انسانی در میزبان E.coli تولید شده و محصول پژوهشکده علوم و فناوری زیستی است. در این تحقیق یک روش حساس با استفاده از پروتئین متصل شونده به تک رشته (SSBP(3))DNA جهت سنجش کمی بقایای E.Coli DNA در پروتئین مذکور طراحی شد. بطوریکه مخلوط DNA ژنومیک و پلاسمیدی استخراج شده از باکتری E. Coli سویه BL-21 حامل پلاسمید دارای ژن rh-G-CSF بعنوان DNA استاندارد و پروتئین rh-G-CSF بعنوان نمونه مجهول روی غشا مورد نظر فیکس شد و غشاء مربوطه با SSBP که قبلاً طی فرایندی با بیوئین کوژوگه گردیده، انکوبه شد و نهایتاً در یک سیستم بلات جهت تعیین کمیت DNA مورد استفاده قرار گرفت. نتایج حاصله نشان می دهد که میزان آلودگی E.Coli DNA در rh-G-CSF کمتر از حد مجاز استاندارد جهانی می باشد.

کلیدواژه ها:

فاکتور محرکه رشد گرانولوسیت نوترکیب انسانی ، بقایای SSBP ، DNA ، بیوتین و آلودگی