کلونینگ، بیان ژن و تخلیص آنزیم CEL I اندونوکلئاز از گیاه کرفس
- سال انتشار: 1391
- محل انتشار: دوازدهمین کنگره ژنتیک ایران
- کد COI اختصاصی: CIGS12_0038
- زبان مقاله: فارسی
- تعداد مشاهده: 963
نویسندگان
کارشناس ارشد زیست شناسی سلولی و مولکولی، دانشگاه آزاد اسلامی واحد علوم و تحقیقات تهران
استادیار ژنتیک مولکولی، مرکز تحقیقات بیولوژی سلولی و مولکولی دانشگاه علوم پزشکی شهید بهشتی
استادیار ژنتیک انسانی، مرکز ژنومیکس دانشگاه علوم پزشکی شهید بهشتی
استاد گروه زیست شناسی، دانشگاه آزاد اسلامی واحد علوم و تحقیقات تهران
چکیده
آنزیم CEL I یک مانوزیل گلیکوپروتئین مخصوص گیاهی است که از دسته کرفس استخراج می شود و از جمله اولین آنزیم یوکاریوتی است که پیوند ناجور را با یک اختصاصییت بالا در یکی از دو رشته DNA برش می دهد. هدف از این پژوهش کلون کردن ژن CEL I در محیط آزمایشگاهی است. در این تحقیق از گیاه کرفس، RNA استخراج شد، و Cdna ساخته شد. ژن CEL I اندونوکلئاز با پرایمرهای اختصاصی از طریق (PCR) تکثیر شد و سپس ژن تکثیر شده در T وکتور کلون گردید. پلاسمید نوترکیب به سلول پذیرای سویه TOP10 باکتری اشرشیاکلی انتقال یافت. پلاسمید نوترکیب استخراج و توسط آنزیم های محدود کننده BamHI, SacI هضم گردید. محصول PCR خالص شده، در وکتور بیانی pET32a ساب کلون شد. این وکتور نوترکیب به سلول پذیرای سویه BL21 باکتری اشرشیاکلی انتقال یافت و با تکنیک های کلونی PCR و هضم آنزیمی تأئید گردید. کلونی حاوی وکتور بیانی نوترکیب کشت شبانه داده شد با استفاده از IPTG، پروموتور ژن القا شده و در ساعت های متفاوت نمونه گیری انجام گرفت و روی ژل SDS-PAGE 10% الکتروفورز شد. باندهای پروتئینی ژل بر روی کاغذ نیتروسلولز انتقال داده شد و سترن بلاتینگ انجام گرفت. بالیز روسب های باکتری، نمونه ها از روی ستون کروماتوگرافی تمایلی (His.Tag/S.Tag) عبور داده شد و سپس کروماتوگرام رسم شد در ادامه روی ژل SDS-PAGE 10% الکتروفورز شد. باندهای پروتئینی ژل بر روی کاغذ نیتروسلولز انتقال داده شد وسترن بلاتینگ انجام گرفت. در نهایت آنزیم CEL I در شرایط آزمایشگاهی با موفقیت تولید شد.کلیدواژه ها
آنزیم CELI اندونوکلئاز، وسترن بلائینگ، پلاسمید pET32a، پروتئین نوترکیب، کروماتوگرافی تمایلیمقالات مرتبط جدید
اطلاعات بیشتر در مورد COI
COI مخفف عبارت CIVILICA Object Identifier به معنی شناسه سیویلیکا برای اسناد است. COI کدی است که مطابق محل انتشار، به مقالات کنفرانسها و ژورنالهای داخل کشور به هنگام نمایه سازی بر روی پایگاه استنادی سیویلیکا اختصاص می یابد.
کد COI به مفهوم کد ملی اسناد نمایه شده در سیویلیکا است و کدی یکتا و ثابت است و به همین دلیل همواره قابلیت استناد و پیگیری دارد.