مجید واحد - پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری، بلوار پژوهش، تهران، ایران
غلامرضا احمدیان - پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری، بلوار پژوهش، تهران، ایران

باکتری Bacilhus pumilus سویه SG2 قبلاً از خاک های شور جدا شده بود و نشان داده شد که دارای توانایی کیتینازی در شرایط نمکی بالا می باشد. سوپ رویی از کشت B.pumilus SG2 که با ؟؟؟؟ القا شده بود دارای دو باند می باشد که بعد از توالی یابی اسید آمینه کیتیناز chiL و chiS نامیده شد. در تحقیق سلولها تحت تأثیر اشعه فرابنفش و اسید نیتروس برای ایجاد موتاسیون در آنها قرار گرفتند. سلول های رویشی B.pumilus ابتدا با اشعه فرابنفش (در محدوده طول موج 240 نانومتر) تیمار شده و سپس در معرض اسید نیتروس قرار گرفتند (0/2 مولار). باکتریهای زنده مانده مورد غربالگری از نظر قابلیت تجزیه کیتین بر روی محیط (Bacilus subtilits miniml medium)BSS آگار دارا با 1% کیتین قرار گرفت سپس جه یافته ها رشد داده شد و هاله های شفاف دورکلونی ها ظاهر شد، که نشان دهنده توانایی تجزیه کیتین بالا و پائین و یکسان نسبت به سویه وحی بودند. از میان چندین کلونی تست شده سویه B.pumilus AV2-9 با قابلیت ایجاد هاله بزرگتر شناسایی شد و ظرفیت فعالیت کیتینازی آن از لحاظ کمی توسط DNS enzyme assay تست شد که بعد از رشد روی محیط BSS کیتین دار برای تولید کیتیناز، سویه های وحشی (SG2) و موتانت (AV2-9) با یکدیگر مقایسه شدند. توالی نوکلئوتیدی کل اوپرون کیتیناز (شامل پروموتر و ناحیه کد کننده دو کیتیناز ChiS و ChiL)، برای دو سویه SG2 و AV2-9 مقایسه شد و اسید آمینه مورد نظر تغییر یافته شناسایی شد. جهت زایی کلاسیک SG2 سلول ها منجر به جداسازی موتانت با فعالیت بیشتر کیتینازی شد. نتایج نان داد که کیتیناز AV2-9 دارای فعالیت کیتیناز بیشتری نسبت به سویه وحشی می باشد. که سنجش آنزیم تعیین کرد که AV2-9 دارای بالاترین فعالیت است، توالی و هم ترازی نشان داد که اسید آمینه (G) جهش یافته، و به اسید آمینه (E) در chil تبدیل شده است.

؛B.pumilus، اشعه فرابنفش، اسید نیتروس، DNS enzyme assay