مرضیه نخعی امرودی - Biochemistry Department, Biological Sciences Faculty, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran
فرنگیس عطائی - Biochemistry Department, Biological Sciences Faculty, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran

اهداف: IP۳ یک مولکول کلیدی تنظیم کننده در مسیر انتقال پیام است و با اتصال به گیرنده های درون سلولی IP۳R روی سطح ذخایر کلسیم داخل سلولی باعث آزادسازی کلسیم به درون سیتوپلاسم می شود. هدف این پژوهش، بیان، تخلیص و تعیین خصوصیات دومین متصل شونده به IP۳ )IP۳BD:۱-۶۰۴ aa( نوع ۲ انسانی بود. مواد و روش ها: در پژوهش تجربی حاضر، پلاسمید pET-۲۸a حامل ژن IP۳BD با روش شیمیایی به داخل باکتری های بیانی E.coli سویه BL۲۱) DE۳( منتقل شد. برای بهینه سازی بیان در سیستم باکتریایی، بیان در شرایط مختلف مورد بررسی قرار گرفت و دماهای بیان مختلف از جمله ۱۶، ۱۸، ۲۰ و C۲۴º، زمان های مختلف بعد از القا، نوع القاکننده و غلظت های مختلف آن بررسی شد. باکتری های القاشده براساس شوک حرارتی از طریق کروماتوگرافی تمایلی ستون نیکل- سفارز تخلیص و میزان خلوص پروتئین از طریق SDS-PAGE بررسی شد. نشر فلورسانس دومین متصل شونده به IP۳ در حضور و عدم حضور لیگاند IP۳ در طول موج ۲۹۵نانومتر اندازه گیری شد. یافته ها: پروتئین در محیط های LB و TB و ۲xYT بیان قابل توجهی نداشت و در زمان های مختلف تغییری در آن مشاهده نشد. بیان پروتئین باکتری در دمای C۲۰º براساس شوک حرارتی C۴۲º نسبت به تمام حالات بیشتر بود. تخلیص باکتری های القاشده براساس شوک حرارتی به سختی تکرار می شد و نمونه های خالص شده نیز غلظت بالایی نداشتند. نشر فلورسانس پروتئین در حضور لیگاند IP۳ کاهش یافت. نتیجه گیری: بیان باکتریایی دومین متصل شونده به IP۳ از گیرنده نوع ۲ گونه انسانی ضعیف است، ولی با القای شوک C۴۲º بیان پروتئین تا حدود نسبتا زیادی افزایش می یابد.

IP۳-binding Receptor, Expression, Intrinsic Fluorescence, Ligand, گیرنده اینوزیتول تری فسفات, بیان, فلورسانس ذاتی, لیگاند