بیان موقت فرم نوترکیب آنزیم اندونوکلئاز PARS II با روش آگرواینفیلتراسیون در گیاه توتون
محل انتشار: فصلنامه زیست فناوری، دوره: 9، شماره: 4
سال انتشار: 1397
نوع سند: مقاله ژورنالی
زبان: فارسی
مشاهده: 162
فایل این مقاله در 7 صفحه با فرمت PDF قابل دریافت می باشد
- صدور گواهی نمایه سازی
- من نویسنده این مقاله هستم
استخراج به نرم افزارهای پژوهشی:
شناسه ملی سند علمی:
JR_BIOT-9-4_017
تاریخ نمایه سازی: 5 دی 1403
چکیده مقاله:
اهداف: تولید پروتئین های نوترکیب در گیاهان تراریخته (زراعت مولکولی)، یکی از جنبه های کاربردی مهندسی ژنتیک محسوب می شود. پروتئین های تولیدشده توسط گیاهان بر خلاف سیستم های تولید مبتنی بر سلول های جانوری و باکتریایی به علت عدم وجود عوامل بیماری زای مشترک انسان و دام، بسیار ایمن هستند و هزینه تولید پایینی دارند. هدف این پژوهش، بیان موقت فرم نوترکیب آنزیم اندونوکلئاز PARS II با استفاده از روش آگرواینفیلتراسیون در گیاه توتون بود.
مواد و روش ها: در مطالعه تجربی حاضر، امکان تولید فرم نوترکیب اندونوکلئاز PARS II با استفاده از سیستم بیان موقت به واسطه آگروباکتریوم مورد بررسی قرار گرفت. سازه بیانی pBI-Pars (مبتنی بر ناقل دوگانه pBI۱۲۱) حاوی توالی کامل رمزکننده PARS II، توالی کوتاه کوزاک در بالادست و توالی رمزکننده هشت آمینواسید هیستیدین در پایین دست ژن، ساخته و با روش آگرواینفلتراسیون به برگ های توتون (Nicotiana tabacum) تزریق شد. پس از گذشت ۷۲ ساعت، بیان ژن مورد نظر در نمونه های آگرواینفیلتره شده با واکنش RT-PCR و بلات نقطه ای با آنتی بادی ضدهیستیدین به ترتیب در سطح mRNA و پروتئین انجام شد.
یافته ها: صحت سازه بیانی ساخته شده تایید شد و نتایج بلات نقطه ای با آنتی بادی ضدهیستیدین، بیان پروتئین نوترکیب PARS II را مورد تایید قرار داد، در حالی که هیچ نشانی از بیان پروتئین نوترکیب در گیاهان شاهد آگرواینفیلتره شده با سازه pBI۱۲۱ مشاهده نشد. مقادیر قابل توجهی از نوکلئاز نوترکیب PARS II در برگ های توتون تولید شد.
نتیجه گیری: روش آگرواینفیلتراسیون یک روش موثر و کوتاه مدت برای تولید انبوه نوکلئاز خالص نوترکیب PARS II در گیاه توتون است.
کلیدواژه ها:
Single-Strand-Specific Nucleases ، PARS II Endonuclease ، Agroinfiltration ، Tobacco ، نوکلئازهای اختصاصی تک رشته ، اندونوکلئاز PARS II ، آگرواینفیلتراسیون ، توتون
نویسندگان
محمد فارسی
Crop Biotechnology & Breeding Department, Agriculture Faculty, Ferdowsi University of Mashhad, Mashhad, Iran
مهدیه میرزایی
Crop Biotechnology & Breeding Department, Agriculture Faculty, Ferdowsi University of Mashhad, Mashhad, Iran
جعفر ذوالعلی
Agricultural Biotechnology Department, Agriculture Faculty, Shahid Bahonar University of Kerman, Kerman, Iran
مراجع و منابع این مقاله:
لیست زیر مراجع و منابع استفاده شده در این مقاله را نمایش می دهد. این مراجع به صورت کاملا ماشینی و بر اساس هوش مصنوعی استخراج شده اند و لذا ممکن است دارای اشکالاتی باشند که به مرور زمان دقت استخراج این محتوا افزایش می یابد. مراجعی که مقالات مربوط به آنها در سیویلیکا نمایه شده و پیدا شده اند، به خود مقاله لینک شده اند :
