کلون سازی فاکتور رشد اکتیوین A انسانی و بررسی تاثیر بیان همزمان چپرونهای سیتوپلاسمی با آن
- سال انتشار: 1400
- محل انتشار: فصلنامه زیست فناوری، دوره: 12، شماره: 2
- کد COI اختصاصی: JR_BIOT-12-2_008
- زبان مقاله: فارسی
- تعداد مشاهده: 55
نویسندگان
Department of Life Science Engineering, Faculty of New Sciences ;Technologies, University of Tehran
Department of Life Science Engineering, Faculty of New Sciences ;Technologies, University of Tehran
Department of Life Science Engineering, Faculty of New Sciences ;Technologies, University of Tehran
چکیده
اکتیوین A یکی از اعضای خانواده ی فاکتور رشد تغییردهنده ی بتا (TGF-β) است که نقش مهمی در فرآیندهای فیزیولوژیکی متعدد همانند تمایز سلولی، ترمیم بافتی، رگ زایی، تمایز سلول های بنیادی، چسبندگی سلولی و آپوپتوز دارد. لذا با توجه به کاربردهای بالینی متعدد این پروتئین، تولید نوترکیب آن سودمند می باشد.از آنجاییکه اشرشیاکلی یکی از محبوب ترین میزبان ها برای تولید پروتئین های نوترکیب است، در این تحقیق از بیان سیتوپلاسمی در این سویه به منظور تولید مقادیر بالایی از اکتیوین A استفاده گردید. بدین منظورابتدا cDNA ناحیه ی بالغ ژن اکتیوین A تکثیر و در وکتور (+)pET۲۸a کلون گردید. وکتور حاصل به سویههای (DE۳)BL۲۱، plysS(DE۳)BL۲۱ و Rosetta gami (DE۳)BL۲۱ انتقال داده شد. پس از القای پروموتر با استفاده از IPTG و بیان پروتئین، تولید اکتیوین A به وسیله ی روش های SDS-PAGE و وسترن بلات تایید شد. نتایج نشان داد که بیان اکتیوین A در سیتوپلاسم هر سه سویه یک رویکرد موثر برای دست یابی به میزان بالایی از پروتئین نوترکیب است اما در این بین، سویه (DE۳)BL۲۱ مقدار بیشتری پروتئین تولید کرده است. در مرحله ی بعد به منظور دست یابی به شکل محلول اکتیوین A از بیان همزمان چپرون های سیتوپلاسمی TF، GroEL/ES و DnaK/J با وکتور (+)pET۲۸a که حامل اکتیوینA بود استفاده شد. نتایج SDS-PAGE و وسترن بلات نشان داد که بیان همزمان اکتیوین A با استفاده از پلاسمید چپرونی pGro۷ که دارای چپرون های GroEL و GroES می باشد، در سویه ی(DE۳)BL۲۱ یک رویکرد موثر برای تولید پروتئین اکتیوین A محلول است.کلیدواژه ها
E. coli, Recombinant protein, Soluble protein, Activin A, اشرشیاکلی, پروتئین نوترکیب, پروتئین محلول, اکتیوین Aاطلاعات بیشتر در مورد COI
COI مخفف عبارت CIVILICA Object Identifier به معنی شناسه سیویلیکا برای اسناد است. COI کدی است که مطابق محل انتشار، به مقالات کنفرانسها و ژورنالهای داخل کشور به هنگام نمایه سازی بر روی پایگاه استنادی سیویلیکا اختصاص می یابد.
کد COI به مفهوم کد ملی اسناد نمایه شده در سیویلیکا است و کدی یکتا و ثابت است و به همین دلیل همواره قابلیت استناد و پیگیری دارد.