بیان نوترکیب و تخلیص زنجیره سبک نوروتوکسین بوتولینوم تیپA در E. coli از یک ژن مصنوعی
- سال انتشار: 1391
- محل انتشار: فصلنامه زیست فناوری، دوره: 3، شماره: 2
- کد COI اختصاصی: JR_BIOT-3-2_001
- زبان مقاله: فارسی
- تعداد مشاهده: 83
نویسندگان
عضو هیات علمی دانشگاه امام (حسین)
دانشجوی کارشناسی ارشد
عضو هیئت علمی
عضو هیئت علمی
عضو علمی گروه
عضو علمی گروه
چکیده
نوروتوکسین های بوتولینوم، سمی ترین ترکیبات بیولوژیک شناخته شده اند که باعث ایجاد فلج عضلانی میشوند. خاصیت آنزیمی این توکسین ها، مهار آزادسازی میانجی عصبی استیل کولین را باعث میشود. مطالعه حاضر با هدف تولید نوترکیب بخش کاتالیتیک (زنجیره سبک) سم بوتولینوم تیپ A با درصد خلوص بالا، به منظور ارزیابی فعالیت آنزیمی انجام شد. توالی ژن زنجیره کاتالیتیک نوروتوکسین بوتولینوم تیپ A از پایگاه ژنی NCBI گرفته شد. پس از بهینه سازی کدون ترجیحی ژن مورد نظر برای E.coli، توالی نهایی ژن به منظور سنتز در وکتور بیانی pET۲۸a(+) سفارش داده شد. پس از انتقال وکتور بیانی نوترکیب دارای ژن مذکور به میزبان E.coli BL۲۱-DE۳ ، فرایند بیان در شرایط استاندارد انجام شد. در ادامه تولید پروتئین مورد نظر به شکل محلول با بهینه سازی کشت میزبان و بیان پروتئین صورت پذیرفت. پروتئین بیانی به وسیله ستون Ni-NTA تخلیصو با آنتی بادی اختصاصی مورد تایید قرار گرفت. در این تحقیق بالاترین میزان بیان به شکل محلول، در شرایط غلظت ۵/۰ میلی مولار IPTG، با جذب نوری ۵/۰ و زمان القای ۱۸ ساعت در دمای ۱۸ درجه سانتی گراد به دست آمد. آزمایش های وسترن بلات و الایزا، وجود پروتئین هدف را تایید کردند.براساس نتایج، زنجیره سبک نوروتوکسین بوتولینوم تیپ A به شکل محلول تولید شد. فرایند تخلیص نیز با رزین تمایلی با کیفیت عالی انجام شد به طوری که پروتئین مورد نظر با درصد خلوص ۹۸ به دست آمد.کلیدواژه ها
Botulinum neurotoxin types A, light chain, catalytic domain, recombinant expression, نوروتوکسین بوتولینوم تیپ A, زنجیره سبک, ناحیه کاتالیتیک, بیان نوترکیباطلاعات بیشتر در مورد COI
COI مخفف عبارت CIVILICA Object Identifier به معنی شناسه سیویلیکا برای اسناد است. COI کدی است که مطابق محل انتشار، به مقالات کنفرانسها و ژورنالهای داخل کشور به هنگام نمایه سازی بر روی پایگاه استنادی سیویلیکا اختصاص می یابد.
کد COI به مفهوم کد ملی اسناد نمایه شده در سیویلیکا است و کدی یکتا و ثابت است و به همین دلیل همواره قابلیت استناد و پیگیری دارد.