بهینه سازی بیان پروتئین اینترلوکین-۵ در باکتری Escherichia Coli سویه ی BL۲۱
- سال انتشار: 1399
- محل انتشار: مجله دانشکده پزشکی اصفهان، دوره: 38، شماره: 592
- کد COI اختصاصی: JR_IMSJ-38-592_003
- زبان مقاله: فارسی
- تعداد مشاهده: 142
نویسندگان
دکتری ژنتیک، گروه زیست شناسی، دانشکده ی علوم پایه، واحد علوم و تحقیقات تهران، دانشگاه آزاد اسلامی، تهران، ایران
دانشیار، گروه ژنتیک و بیولوژی مولکولی،، دانشکده ی پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی اصفهان، اصفهان، ایران
دانشیار، گروه زیست شناسی، دانشکده ی علوم پایه، واحد علوم و تحقیقات تهران، دانشگاه آزاد اسلامی، تهران، ایران
دانشیار، گروه ژنتیک، دانشکده ی پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی ایلام، ایلام، ایران
چکیده
مقدمه: در آسم، رابطه ی بین تعداد ائوزینوفیل ها و شدت بیماری، این فرضیه را تقویت می کند که ائوزینوفیل، سلول موثر اصلی در التهاب راه های هوایی است. تکامل ائوزینوفیل به طور عمده با اینترلوکین-۵ تنظیم می شود. بنابراین، با ممانعت از عملکرد اینترلوکین- ۵ (IL-۵)، می توان حداقل یکی از دلایل ایجاد آسم را سرکوب کرد. برای تولید آنتاگونیست هایی مثل آپتامر ضد اینترلوکین-۵، لازم است این پروتئین به مقدار زیاد و با خلوص بالا بیان گردد. مطالعه ی حاضر با هدف تهیه ی اپتامر ضد IL-۵ به جای آنتی بادی جهت استفاده در درمان بیماری های ائوزینوفیلیک و بیان این پروتئین در یک سیستم پروکاریوتی انجام شد.روش ها: ابتدا سازه ی حاوی complementary DNA (cDNA) ژن پروتئین اینترلوکین-۵ طراحی و سفارش ساخت در وکتور pET۲۸a داده شد. وکتور بیانی به باکتری های مستعد شده ی Escherichia coli BL۲۱ (DE۳) تبدیل شد. سپس، بیان پروتئین با تغییر شرایط دما و زمان انکوباسیون و میزان Isopropyl β- d-۱-thiogalactopyranoside (IPTG) بهینه گردید. ارزیابی بیان پروتئین با به کار گیری روش های Western blot و Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) و در مراحل مختلف صورت گرفت.یافته ها: شرایط بهینه برای بیان پروتئین اینترلوکین-۵، غلظتی از باکتری که در طول موج ۶۰۰ نانومتر جذب بین ۸/۰-۶/۰ داشت، غلظت نهایی ۱ میلی مولار برای IPTG، ۱۸ ساعت انکوباسیون در دمای ۲۹ درجه ی سانتی گراد و شتاب ۱۵۰ دور/دقیقه بود. باند ۱۳ کیلودالتونی روی ژل پلی آکریل آمید در SDS-PAGE و غشای نیتروسلولزی در روش Western blot تایید کننده ی بیان پروتئین اینترلوکین-۵ بود.نتیجه گیری: از این پروتئین، در فرایندهایی چون تهیه ی آپتامر بر علیه IL-۵ و کیت های Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA)ی مخصوص اندازه گیری IL-۵ می توان استفاده نمود. در این فرایندها، به آنتی ژن با فولدینگ بسیار صحیح نیاز نمی باشد. بنابراین، بیان در سیستم پروکایوتی به علت بازده بالا انجام شد.کلیدواژه ها
سیستم بیانی, اینترلوکین-۵, سیستم پروکاریوتی, Escherichia coliاطلاعات بیشتر در مورد COI
COI مخفف عبارت CIVILICA Object Identifier به معنی شناسه سیویلیکا برای اسناد است. COI کدی است که مطابق محل انتشار، به مقالات کنفرانسها و ژورنالهای داخل کشور به هنگام نمایه سازی بر روی پایگاه استنادی سیویلیکا اختصاص می یابد.
کد COI به مفهوم کد ملی اسناد نمایه شده در سیویلیکا است و کدی یکتا و ثابت است و به همین دلیل همواره قابلیت استناد و پیگیری دارد.