بررسی خصوصیات مولکولی Puccinia chrysanthemi و Puccinia sp. و شناسایی آنها با استفاده از روش PCR-RFLP

زنگ ازجمله بیماریهای مهم گل داوودی است که توسط گونههای Puccinia sp ،Puccinia chrysanthemi زنگ قهوه ای) و Puccinia horiana (زنگ سفید) ایجاد می شود. بسیاری از ارقام تجاری داوودی نسبت به زنگ حساس می باشند. با توجه به توسعه ناگهانی و شدید علائم بیماری در شرایط مساعد، شناسایی سریع بیمارگر قبل از ظهور علائم ضروری است. در این مطالعه استخراج DNA DNA مساعد، شناسایی سریع بیمارگر قبل از ظهور علائم ضروری است. در این مطالعه استخراج DNA از جوشهای بیمارگر جمع آوری شده از نمونههای هرباریومی با روش% 2 CTAB انجام شد. ویژگی های مولکولی گونه ها بر اساس تکثیر ناحیه rDNA-ITS با استفاده از جفت آغازگر ITS1F/Rus1 و تعیین توالی نوکلئوتیدی انجام شد. نتایج تکثیر منجر به تولید قطعات حدود 1260 و 1238 جفت بازی به ترتیب برای گونههای P. chrysanthemi و P. chrysanthemi گردید. توالی نوکلئوتیدی کامل ناحیه rDNA-ITS این جدایهها بهترتیب با کدهای شناسایی HQ201322 و HQ201330-31 در GenBank قرار داده شدند. شناسایی مولکولی بیمارگر بر اساس آنالیز ناحیه rDNA-ITS تکثیر شده با آغازگرهای اختصاصی زنگها و هضم آنزیمی با آنزیم برشی ApoI با استفاده از روش PCR-RFLP انجام شد. نتایج نشان داد که نمونههای مورد مطالعه پس از تیمار محصول PCR حاصل از Rust3/R157 ا آنزیم برشی ApoI چهار قطعه 37 ، 6 ، 78 و 69 جفت بازی برای گونه P. chrysanthemi و یک قطعه 205 جفت بازی برایر Puccinia sp. درحالیکه برای محصول PCR حاصل از Rust3/ITS4 چهار قطعه 37 ، 66 ، 78 و 161 جفت بازی برای گونه P. chrysanthemi و یک قطعه 329 جفت بازی برای Puccinia sp. ید میکند. به هر حال، روش PCR-RFL با استفاده از آنزیم برشی ApoI با ارائه یک الگوی منحصر به فرد برای هر گونه روشی آسان برای تفکیک بیمارگرهای زنگ داوودی میباشد.

کلیدواژه ها:

rDNA-ITS ، استخراج DNA ، زنگ قهوه ای داوودی ، هضم آنزیمی