فرزانه ملک پور - کارشناسی ارشد میکروب شناسی

زمینه و هدف :. تشکیل لخته خونی در سیستم گردش خون ممکن است باعث بسته شدن رگ های خونی، بروز سکته های قلبی-مغزی و نهایتا مرگ گردد. در چنین مواردی ، استفاده از عوامل ترومبولیتیک یا فیبرینولیتیک ، مانند استرپتوکیناز ، فعال کننده پلاسمینوژن بافتی بوده یک آنزیم خارج سلولی است ضروری است که این ها به وسیله باکتری ها تولید می شوند. باسیلوس ها حامل ژن های آنزیمی مختلفی می باشند که نقش در ساخت داروهای مختلف دارند هدف از پژوهش حاضر مطالعه مولکولی، تخلیص، همسانه سازی ژن آنزیم استرپتوکیناز از باسیلوس های هالوفیل جهت استفاده بعنوان داروی ترمبولیتیک است.روش کار : سویه های جنس باسیلوس از مجموع ۱۱۰ نمونه خاک از نمک زار های اطراف قم جداسازی و باکتری های باسیلوس از لحاظ بیوشیمیایی و مرفولوژیک تعیین هویت شدند . پس از استخراج DNA ژن SKa با تکنیک PCR از این باسیلوس ها جداسازی گردید . قطعه تکثیر یافته توسط روش TA کلونینگ به داخل وکتور pTG۱۹ وارد شد. در مرحله بعد به باکتری E.coli uragami ترانسفورم شد و با استفاده از روش های رایج کلونینگ صورت گرفت . در ادامه با تکنیک SDS page پروتئین استرپتوکیناز خالص سازی شد.نتایج : واکنش PCR برای ژن های استرپتوکیناز با پرایمرهای اختصاصی انجام شد. از ۱۱۰ نمونه خاک ارسالی ۱۲ ایزوله باسیلوس جداسازی شد که ۳ ایزوله (۲۵%) حامل ژن استرپتوکیناز بودند. تایید نتایج کلونینگ با استفاده از کلنی سفید وآبی ، پرایمرm۱۳ ، توای یابی صورت گرفت وآزمون Real time PCR جهت بررسی حضور ژن آنزیم استرپتوکیناز انجام شد. به منظور تعیین هویت مولکولی جنس باسیلوس حامل ژن استرپتوکیناز از پرایمر خانگی SrRNA ۱۶ استفاده شد. در نهایت آنالیز sds page پروتئین ۶۵ کیلو دالتونی استرپتوکیناز تخلیص شد. نتیجه گیری : در نتیجه این پژوهش موفق به پیدا کردن باسیلوس های هالوفیل حامل ژن های مولد آنزیم SKa شده که با موفقیت به باکتری E.coli جهت تولید با بازدهی بالا داروهای ترومبولیتیک ، وارد گردید و پس از کلونینگ به صورت پروتئین خالص سازی شدند

باکتری، آنتی بیوتیک، DNA