بررسی ترانسفکت وکتورهای نوترکیب آدنوویروسی فاقد ژن گزارشگر و تیتراسیون آن با روش های مولکولی: راهنمای عملی
- سال انتشار: 1391
- محل انتشار: فصلنامه پژوهشی خون، دوره: 9، شماره: 4
- کد COI اختصاصی: JR_BLOOD-9-4_003
- زبان مقاله: فارسی
- تعداد مشاهده: 234
نویسندگان
دانشکده پزشکی دانشگاه تربیت مدرس و مرکز تحقیقات انتقال خون موسسه عالی آموزشی و پژوهشی طب انتقال خون
استاد دانشکده پزشکی دانشگاه تربیت مدرس
استاد دانشکده پزشکی دانشگاه بقیه اله و مرکز تحقیقات بیماری های خونی مادرزادی کودکان دانشگاه علوم پزشکی شهید بهشتی
استادیار مرکز تحقیقات انتقال خون موسسه عالی آموزشی و پژوهشی طب انتقال خون
دانشیار مرکز تحقیقات انتقال خون موسسه عالی آموزشی و پژوهشی طب انتقال خون
استادیار دانشکده پزشکی دانشگاه علوم پزشکی بوشهر
چکیده
چکید ه سابقه و هدف خصوصیات بیولوژی آدنوویروس، آن را به وکتوری مناسب در تحقیقات پایه به عنوان ابزار انتقال ژن و هم چنین در درمان بالینی بسیاری از بیماری ها و واکسیناسیون مبدل کرده است. در این مطالعه، ترانسفکشن آدنوویروس فاقد ژن گزارشگر و هم چنین تیتراسیون آن به وسیله روش های مولکولی مورد ارزیابی قرار گرفت. مواد و روش ها در یک مطالعه تجربی، پس از ساخت آدنوویروس نوترکیب، وجود ترانس ژن در سازه ژنی با استفاده از آغازگرهای اختصاصی آن با روش PCR و هم چنین تعیین توالی ارزیابی شد. به منظور پایش ترانسفکشن، DNA استخراج شده از سلول های ترانسفکت شده با استفاده از آغازگرهای اختصاصی ترانس ژن با روش PCR مورد بررسی قرار گرفت. تیتر ویروس به روش Real-time PCR و با استفاده از آغازگرهای تشخیصی بر روی DNA استخراج شده از لیزات ویروس تعیین شد. یافته ها وجود ترانس ژن در سازه ژنی نوترکیب با استفاده از آغازگرهای اختصاصی ترانس ژن و هم چنین تعیین توالی تایید شد. بررسی DNA استخراج شده از سلول های HEK ۲۹۳A ترانسفکت شده، موفقیت کیفی ترانسفکشن را مورد تایید قرار داد و هم چنین تعداد ذرات ویروس با استفاده از Real-time PCR حدود ۱۰۷ × ۵ در واحد حجم(میلی لیتر) برآورد شد. نتیجه گیری با طراحی و مهندسی هدفمند آغازگر، می توان موفقیت یا عدم موفقیت ترانسفکشن را به صورت کیفی در کار با وکتورهای آدنوویروسی فاقد ژن گزارشگر، ارزیابی نمود. هم چنین با استفاده از روش Real-time PCR و به کارگیری روش های مناسب جداسازی ژنوم کامل ویروس از لیزات آن، از محدودیت های تیتراسیون کیفی آدنوویروس اجتناب ورزید.کلیدواژه ها
Key words: Adenoviruses, Transfection, PCR, کلمات کلیدی : آدنوویروس ها, ترانسفکشن, PCRاطلاعات بیشتر در مورد COI
COI مخفف عبارت CIVILICA Object Identifier به معنی شناسه سیویلیکا برای اسناد است. COI کدی است که مطابق محل انتشار، به مقالات کنفرانسها و ژورنالهای داخل کشور به هنگام نمایه سازی بر روی پایگاه استنادی سیویلیکا اختصاص می یابد.
کد COI به مفهوم کد ملی اسناد نمایه شده در سیویلیکا است و کدی یکتا و ثابت است و به همین دلیل همواره قابلیت استناد و پیگیری دارد.