The detection of Klebsiella pneumoniae ۱۶srRNA specific gene by PCR-ELISA technique
- سال انتشار: 1394
- محل انتشار: مجله علوم پیشرفته زیست پزشکی، دوره: 5، شماره: 4
- کد COI اختصاصی: JR_JABS-5-4_012
- زبان مقاله: فارسی
- تعداد مشاهده: 144
نویسندگان
Applied Microbiology Research Center, Baqiyatallah University of Medical Sciences, Tehran, Iran.
Applied Microbiology Research Center, Baqiyatallah University of Medical Sciences, Tehran, Iran.
Department of Biology, Damghan Azad University, Damghan, Iran.
Applied Microbiology Research Center, Baqiyatallah University of Medical Sciences, Tehran, Iran.
چکیده
زمینه و هدف: کلبسیلا پنومونیه از اعضای خانواده ی انتروباکتریاسه یکی از مهم ترین عامل های عفونت های بیمارستانی می باشد که بعد از Escherichia coli دومین عامل باکتریمی بیمارستانی ناشی از باکتری های گرم منفی است. در این تحقیق هدف شناسایی این باکتری از طریق ژن اختصاصی ۱۶SrDNA با به کارگیری تکنیک PCR-ELISA می باشد. مواد و روش ها: در این روش با استفاده از dNTP نشان دار شده با دیگوکسی ژنین برای تکثیر ژن اختصاصی استفاده شد. کف پلیت الایزا استرپتوآویدین بارگذاری کرده سپس با استفاده از پروب اختصاصی که قسمت ابتدای آن بیوتینه شده بود جهت اتصال به ژن تکثیر شده استفاده گردید. بیوتین متصل به پروب به استرپتوآویدین متصل شده، همچنین ژن تکثیر یافته نیز به پروب اختصاصی متصل شده در نهایت از آنتی بادی ضد دیگوکسی ژنین برای شناسایی محصول استفاده شد و واکنش با دستگاه نور سنج اندازه گیری شد. نتایج: با استفاده از پرایمرهای اختصاصی ژن ۱۶SrDNA کلبسیلا پنومونیه تکثیر شد که نتیجه آن یک قطعه به طول bp ۲۶۰ بود. نتایج حاصل از PCR-ELISA نشان داد که این تکنیک هیچ واکنش متقاطعی با با کتری های هم خانواده خود ندارد، همچنین میزان حساسیت آن ۶/۰ نانوگرم ارزیابی شد. نتیجه گیری: تکنیک PCR-ELISA روشی حساس و دقیق بوده که برای شناسایی عوامل بیماری زا با استفاده از ژن اختصاصی آن باکتری به کار می رود. این تکنیک می تواند جایگزین مناسبی برای تکنیک های زمان بر، با حساسیت کمتر و هزینه بیشتر، همچون روش های کشت باکتری در محیط های بلاد آگار و مک کانکی آگار، Realtime PCR ، تست های بیوشیمیایی افتراقی که امروزه در آزمایشگاه ها مورد استفاده قرار می گیرد، باشد.کلیدواژه ها
Enterobacteriaceae, Klebsiella pneumoniae, ۱۶SrDNA, PCR-ELISA, انتروباکتریاسه, کلبسیلا پنومونیه, ۱۶SrDNA, PCR-ELISAاطلاعات بیشتر در مورد COI
COI مخفف عبارت CIVILICA Object Identifier به معنی شناسه سیویلیکا برای اسناد است. COI کدی است که مطابق محل انتشار، به مقالات کنفرانسها و ژورنالهای داخل کشور به هنگام نمایه سازی بر روی پایگاه استنادی سیویلیکا اختصاص می یابد.
کد COI به مفهوم کد ملی اسناد نمایه شده در سیویلیکا است و کدی یکتا و ثابت است و به همین دلیل همواره قابلیت استناد و پیگیری دارد.