Cloning of linear T-cell epitops of EG۹۵ antigen of Echinococcus granulosus into pGEX۴t۱ vector and expression analysis by SDS-PAGE
عنوان مقاله: Cloning of linear T-cell epitops of EG۹۵ antigen of Echinococcus granulosus into pGEX۴t۱ vector and expression analysis by SDS-PAGE
شناسه ملی مقاله: JR_JABS-6-3_005
منتشر شده در در سال 1395
شناسه ملی مقاله: JR_JABS-6-3_005
منتشر شده در در سال 1395
مشخصات نویسندگان مقاله:
رقیه مصری - Department of Cellular & Molecular, Faculty of Biological Sciences, Kharazmi University, Tehran, Iran.
مجید اسمعیلی زاد - Central lab, Razi Vaccine and Serum Research Institute, Karaj, Iran.
مژگان احمدزاده - Department of Cellular & Molecular, Faculty of Biological Sciences, Kharazmi University, Tehran, Iran.
سمیه محمدی - Department of Cellular & Molecular, Faculty of Biological Sciences, Kharazmi University, Tehran, Iran.
سید عبدالحمید انگجی - Department of Cellular & Molecular, Faculty of Biological Sciences, Kharazmi University, Tehran, Iran.
زهرا یزدان پور - Central lab, Razi Vaccine and Serum Research Institute, Karaj, Iran.
سیده فهیمه میر حقگوی جلالی - Central lab, Razi Vaccine and Serum Research Institute, Karaj, Iran.
خلاصه مقاله:
رقیه مصری - Department of Cellular & Molecular, Faculty of Biological Sciences, Kharazmi University, Tehran, Iran.
مجید اسمعیلی زاد - Central lab, Razi Vaccine and Serum Research Institute, Karaj, Iran.
مژگان احمدزاده - Department of Cellular & Molecular, Faculty of Biological Sciences, Kharazmi University, Tehran, Iran.
سمیه محمدی - Department of Cellular & Molecular, Faculty of Biological Sciences, Kharazmi University, Tehran, Iran.
سید عبدالحمید انگجی - Department of Cellular & Molecular, Faculty of Biological Sciences, Kharazmi University, Tehran, Iran.
زهرا یزدان پور - Central lab, Razi Vaccine and Serum Research Institute, Karaj, Iran.
سیده فهیمه میر حقگوی جلالی - Central lab, Razi Vaccine and Serum Research Institute, Karaj, Iran.
زمینه و هدف: انگل اکینوکوکوس گرانولوزوس عامل بیماری مشترک بین انسان و دام به نام کیست هیداتیک یا هیداتیدوزیس است؛ موفقترین واکسن نوترکیب علیه این بیماری از کلون کردن ژن کد کننده آنتیژن ۲۵ کیلو دالتونی آن یعنی EG۹۵ در وکتور pGEX میباشد که ایمنی سلولی و همورال قابل توجهی را در گوسفندان ایجاد کرده است اما با توجه به نقش ایمنی سلولی TH۱ در غلبه بر این بیماری و نقش اپیتوپهای خطی در تحریک این نوع سیستم ایمنی جهت بهینه سازی شرایط واکسن موجود در مطالعه حاضر تنها توالی کد کننده اپیتوپهای خطی تحریک کننده لنفوسیت T این آنتیژن کلون و بیان شد.
مواد و روشها: با استفاده از نرم افزار IEDB توالی کد کننده ی اپیتوپهای خطی آنتیژن EG۹۵ پیشبینی و سنتز شد. تکثیر قطعه موردنظر با PCR انجام و بعد از هضم آنزیمی آن و وکتور pGEX۴T۱ با آنزیم xhoI، در وکتور با روش شوک حرارتی کلون گردید. کلونیهای مثبت با روش colony PCR با استفاده از پرایمرهای مختلف انتخاب شده و بیان پروتئین نوترکیب در سلول BL۲۱ با ۱۰%SDS-PAGE موردبررسی قرار گرفت.
نتایج: تکثیر توالی کد کننده اپیتوپهای EG۹۵ با PCR انجام و قطعه موردنظر در وکتور pGEX۴T۱ کلون گردید. تایید پلاسمید نوترکیب با colony PCR و اختلاف اندازه وکتور طبیعی و نوترکیب صورت گرفت. بیان پروتئین نوترکیب آنتیژن نیز به وضوح با SDS-PAGE مشخص شد.
نتیجه گیری: قطعه EG۹۵ به طور موفقیتآمیزی در وکتور pGEX۴T۱ کلون و در سلول BL۲۱ بیان شد.
کلمات کلیدی: EG۹۵ antigen, Epitope vaccine, Hydatid cyst, T lymphocyte, واکسن های اپی توپی, لنفوسیت T, آنتی ژن EG۹۵, کیست هیداتیک
صفحه اختصاصی مقاله و دریافت فایل کامل: https://civilica.com/doc/1805156/