Cloning of linear T-cell epitops of EG۹۵ antigen of Echinococcus granulosus into pGEX۴t۱ vector and expression analysis by SDS-PAGE
- سال انتشار: 1395
- محل انتشار: مجله علوم پیشرفته زیست پزشکی، دوره: 6، شماره: 3
- کد COI اختصاصی: JR_JABS-6-3_005
- زبان مقاله: فارسی
- تعداد مشاهده: 72
نویسندگان
Department of Cellular & Molecular, Faculty of Biological Sciences, Kharazmi University, Tehran, Iran.
Central lab, Razi Vaccine and Serum Research Institute, Karaj, Iran.
Department of Cellular & Molecular, Faculty of Biological Sciences, Kharazmi University, Tehran, Iran.
Department of Cellular & Molecular, Faculty of Biological Sciences, Kharazmi University, Tehran, Iran.
Department of Cellular & Molecular, Faculty of Biological Sciences, Kharazmi University, Tehran, Iran.
Central lab, Razi Vaccine and Serum Research Institute, Karaj, Iran.
Central lab, Razi Vaccine and Serum Research Institute, Karaj, Iran.
چکیده
زمینه و هدف: انگل اکینوکوکوس گرانولوزوس عامل بیماری مشترک بین انسان و دام به نام کیست هیداتیک یا هیداتیدوزیس است؛ موفقترین واکسن نوترکیب علیه این بیماری از کلون کردن ژن کد کننده آنتیژن ۲۵ کیلو دالتونی آن یعنی EG۹۵ در وکتور pGEX میباشد که ایمنی سلولی و همورال قابل توجهی را در گوسفندان ایجاد کرده است اما با توجه به نقش ایمنی سلولی TH۱ در غلبه بر این بیماری و نقش اپیتوپهای خطی در تحریک این نوع سیستم ایمنی جهت بهینه سازی شرایط واکسن موجود در مطالعه حاضر تنها توالی کد کننده اپیتوپهای خطی تحریک کننده لنفوسیت T این آنتیژن کلون و بیان شد. مواد و روشها: با استفاده از نرم افزار IEDB توالی کد کننده ی اپیتوپهای خطی آنتیژن EG۹۵ پیشبینی و سنتز شد. تکثیر قطعه موردنظر با PCR انجام و بعد از هضم آنزیمی آن و وکتور pGEX۴T۱ با آنزیم xhoI، در وکتور با روش شوک حرارتی کلون گردید. کلونیهای مثبت با روش colony PCR با استفاده از پرایمرهای مختلف انتخاب شده و بیان پروتئین نوترکیب در سلول BL۲۱ با ۱۰%SDS-PAGE موردبررسی قرار گرفت. نتایج: تکثیر توالی کد کننده اپیتوپهای EG۹۵ با PCR انجام و قطعه موردنظر در وکتور pGEX۴T۱ کلون گردید. تایید پلاسمید نوترکیب با colony PCR و اختلاف اندازه وکتور طبیعی و نوترکیب صورت گرفت. بیان پروتئین نوترکیب آنتیژن نیز به وضوح با SDS-PAGE مشخص شد. نتیجه گیری: قطعه EG۹۵ به طور موفقیتآمیزی در وکتور pGEX۴T۱ کلون و در سلول BL۲۱ بیان شد.کلیدواژه ها
EG۹۵ antigen, Epitope vaccine, Hydatid cyst, T lymphocyte, واکسن های اپی توپی, لنفوسیت T, آنتی ژن EG۹۵, کیست هیداتیکاطلاعات بیشتر در مورد COI
COI مخفف عبارت CIVILICA Object Identifier به معنی شناسه سیویلیکا برای اسناد است. COI کدی است که مطابق محل انتشار، به مقالات کنفرانسها و ژورنالهای داخل کشور به هنگام نمایه سازی بر روی پایگاه استنادی سیویلیکا اختصاص می یابد.
کد COI به مفهوم کد ملی اسناد نمایه شده در سیویلیکا است و کدی یکتا و ثابت است و به همین دلیل همواره قابلیت استناد و پیگیری دارد.