طراحی و ساخت کلون بیان کننده داروی ضد انعقادی دسیرودین (هیرودین) به شکل خارج سلولی در اشرشیا کلی
- سال انتشار: 1393
- محل انتشار: مجله دانشگاه علوم پزشکی مازندران، دوره: 24، شماره: 119
- کد COI اختصاصی: JR_JMUMS-24-119_008
- زبان مقاله: فارسی
- تعداد مشاهده: 138
نویسندگان
MSc in Cellular and Molecular Biology, Department of Biology, Pharmaceutical Sciences Branch, Islamic Azad University,Tehran, Iran
Assistant Professor, Biotechnology Research Center, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran
Assistant Professor, Biotechnology Research Center, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran
Assistant Professor, Department of Biology, Pharmaceutical Sciences Branch, Islamic Azad University,Tehran, Iran
چکیده
سابقه و هدف: هیرودین پلی پپتیدی با ۶۵ تا ۶۶ اسید آمینه است که به عنوان داروی ضدانعقادی، از غدد بزاقی زالو ترشح می شود. این دارو، مهارکننده بسیار قوی ترومبین می باشد بنابراین می تواند رقیبی برای هپارین نیز باشد. هدف از این مطالعه، الحاق توالی سیگنال پپتید pelB (توالی سیگنال پپتید pelB روی سکانس پلاسمید pET-۲۲b تعبیه شده است) و بررسی بیان پروتئین نوترکیب هیرودین در اشرشیاکلی می باشد. مواد و روش ها: ترادف ۶۶ آمینواسیدی واریانت HV۳ ژن هیرودین تهیه و به داخل یک وکتور بیانی قوی (pET-۲۲b) انتقال داده شد. برای تسهیل در تخلیص پروتئین از His-tag در ناحیه N-ترمینال ژن استفاده گردید. سیگنال پپتید pelB در ابتدای ژن با هدف ترشح به فضای پری پلاسمیک و محیط کشت درج شد و ساختار پلاسمیدی حاصله توسط سویه OrigamiB (DE۳) باکتری E.coli بیان شد. در نهایت میزان بیان پروتئین تولیدی در ناحیه سیتوپلاسم، فضای پری پلاسمی و محیط کشت مقایسه گردید. یافته ها: نتایج به دست آمده نشان می دهد که مقدار پروتئین بیشتری در فضای پری پلاسمیک بیان شده و مقدار کمی پروتئین نیز به محیط کشت ترشح گردیده است. استنتاج: با به کارگرفتن وکتورهایی که قادر به انتقال پروتئین هدف به فضای پری پلاسمیک، که محیطی بسیار مطلوب برای شکل گیری باندهای دی سولفید و فلدینگ صحیح پروتئین هدف هستند، احتمال تشکیل اینکلوژن بادی ها کاهش یافته و تولید پروتئین های محلول و فعال افزایش می یابد.کلیدواژه ها
pelB signal sequence, hirudin, desirudin, anticoagulant, periplasmic, سیگنال پپتید pelB, هیرودین, دسیرودین, ضد انعقادی, پری پلاسمیکاطلاعات بیشتر در مورد COI
COI مخفف عبارت CIVILICA Object Identifier به معنی شناسه سیویلیکا برای اسناد است. COI کدی است که مطابق محل انتشار، به مقالات کنفرانسها و ژورنالهای داخل کشور به هنگام نمایه سازی بر روی پایگاه استنادی سیویلیکا اختصاص می یابد.
کد COI به مفهوم کد ملی اسناد نمایه شده در سیویلیکا است و کدی یکتا و ثابت است و به همین دلیل همواره قابلیت استناد و پیگیری دارد.