بیان پروتئین Omp۲۵ بروسلا آبورتوس در باکتری پروبیوتیک لاکتوکوکوس لاکتیس

  • سال انتشار: 1401
  • محل انتشار: مجله دانشگاه علوم پزشکی مازندران، دوره: 32، شماره: 217
  • کد COI اختصاصی: JR_JMUMS-32-217_002
  • زبان مقاله: فارسی
  • تعداد مشاهده: 83
دانلود فایل این مقاله

نویسندگان

سمیه تیربخش گوران

PhD Student in Molecular Genetics, Department of Biology, Shahrekord Branch, Islamic Azad University, Shahrekord, Iran

عباس دوستی

Associate Professor, Biotechnology Research Center, Shahrekord Branch, Islamic Azad University, Shahrekord, Iran

محمدسعید جامی

Assistant Professor, Cellular and Molecular Research Center, Basic Health Sciences Research Institute, Shahrekord University of Medical Sciences, Shahrekord, Iran . Department of Biology, Shahrekord Branch, Islamic Azad University, Shahrekord, Iran

چکیده

سابقه و هدف: در تمام گونه های باکتری بروسلا، توالی ژن Omp۲۵ حفاظت شده است. خاصیت آنتی ژنیسیته بالای محصول این ژن باعث تحریک سیستم ایمنی میزبان می شود. استفاده از باکتری پروبیوتیک مهندسی شده، روش مناسبی برای انتقال واکسن است. این مطالعه با هدف بیان Omp۲۵ باکتری بیماری زای بروسلا آبورتوس در باکتری پروبیوتیک لاکتوکوکوس لاکتیس، انجام پذیرفت. مواد و روش ها: در این مطالعه تجربی، وکتور مورد نظر به همراه ژن و سیگنال پپتید (pNZ۸۱۴۸-Usp۴۵-Omp۲۵) طراحی و سنتز گردید. باکتری E. coli سویه TOP۱۰F با وکتور بیانی pNZ۸۱۴۸-Usp۴۵-Omp۲۵ مبتنی بر القا توسط نیسین ترانسفورم شد. با استفاده از کیت استخراج پلاسمید، از باکتری های ترانسفورم شده پلاسمید نوترکیب استخراج گردید. ترانسفورماسیون باکتری پروبیوتیک لاکتوکوکوس لاکتیس با وکتور pNZ۸۱۴۸-Usp۴۵-Omp۲۵، توسط روش الکتروپوریشن انجام گرفت. بررسی بیان ژن Omp۲۵ در سطح RNA، به روش رونوشت برداری معکوس و تایید حضور پروتئین نوترکیب Omp۲۵ در باکتری مهندسی شده با روش SDS-PAGE، ارزیابی شد. یافته ها: بیان موفقیت آمیز پروتئین  Omp۲۵بروسلا آبورتوس در باکتری لاکتوکوکوس لاکتیس با RT-PCR تایید شد. با استفاده از روش سدیم دودسیل سولفات- پلی آکریل آمید ژل الکتروفورز (SDS-PAGE)، پروتئین ها براساس وزن مولکولی از یکدیگر تفکیک شدند .آنالیز بیان پروتئین ها، بیانOmp۲۵  را به صورت یک باند پروتئینی ۲۵ کیلو دالتونی اضافه در باکتری لاکتوکوکوس لاکتیس ترانسفورم شده با pNZ۸۱۴۸-Usp۴۵-Omp۲۵ در مقایسه با لاکتوکوکوس لاکتیس ترانسفورم شده با pNZ۸۱۴۸ (وکتور فاقد ژن هدف) نشان داد. استنتاج: مطالعه حاضر نشان داد که پروتئین Omp۲۵ در باکتری پروبیوتیک لاکتوکوکوس لاکتیس ترانسفورم شده توسط الکتروپوریشن با وکتور نوترکیب pNZ۸۱۴۸-Usp۴۵-Omp۲۵ بیان می شود. باکتری لاکتوکوکوس لاکتیس ترانسفورم شده، می تواند در مطالعات آینده به عنوان واکسن زیر واحدی خوراکی جهت پیشگیری از بروسلوز، مناسب باشد.

کلیدواژه ها

Brucella, Omp۲۵, Lactococcus lactis, probiotic, electroporation, بروسلا, Omp۲۵, لاکتوکوکوس لاکتیس, پروبیوتیک, الکتروپوریشن

اطلاعات بیشتر در مورد COI

COI مخفف عبارت CIVILICA Object Identifier به معنی شناسه سیویلیکا برای اسناد است. COI کدی است که مطابق محل انتشار، به مقالات کنفرانسها و ژورنالهای داخل کشور به هنگام نمایه سازی بر روی پایگاه استنادی سیویلیکا اختصاص می یابد.

کد COI به مفهوم کد ملی اسناد نمایه شده در سیویلیکا است و کدی یکتا و ثابت است و به همین دلیل همواره قابلیت استناد و پیگیری دارد.