بیان ژن FSH انسانی در سلول تخمدان همستر چینی و بررسی فعالیت آن در مدل حیوانی رت
- سال انتشار: 1397
- محل انتشار: دانشور پزشکی (نشریه پژوهشی پایه و بالینی)، دوره: 26، شماره: 6
- کد COI اختصاصی: JR_DMED-26-6_001
- زبان مقاله: فارسی
- تعداد مشاهده: 156
نویسندگان
گروه میکروبیولوژی دانشکده علوم پایه دانشگاه شاهد، تهران، ایران
گروه ژنتیک پزشکی و زیست شناسی مولکولی دانشگاه علوم پزشکی ایران، تهران، ایران
گروه ژنتیک پزشکی و زیست شناسی مولکولی دانشگاه علوم پزشکی ایران، تهران، ایران
گروه داروسازی دانشگاه شهید بهشتی،تهران، ایران
گروه زیست شناسی میکروبیولوژی دانشگاه شاهد، تهران، ایران
چکیده
مقدمه و هدف: FSH هورمون گلیکوپروتئین هترودایمری است که در رشد و بلوغ اندام های جنسی و صفات ثانویه موثر است. گنادوتروپین های قابل تزریق نقش پیشرو در درمان ناباروری داشته اند. تولید FSH در داخل کشور یکی از اهداف مهم پیرامون این دارو است. هدف از این مطالعه امکان تولید آزمایشگاهی FSH نوترکیب می باشد. مواد و روشها: وکتور حاوی زیر واحد آلفا و بتای ژن FSH انسانی در باکتری DH۵α انتقال و پلاسمید جداسازی و توسط لیپوفکتامین ۲۰۰۰ به سلول تخمدان همستر چینی ترانسفکت شد. سلول ها بوسیله نئومایسین به مدت ۱۰ روز تیمار و سلولهای ترانسفکت شده انتخاب شدند. بیان پروتئین بوسیله الایزا مورد بررسی قرار گرفت. محصول با روش کروماتوگرافی افینیتی خالص شد. جهت محاسبه راندمان تخلیص، غلظت پروتئین قبل و بعد از کروماتوگرافی به وسیله الایزا مورد سنجش قرار گرفت. جهت تائید خلوص پروتئین از روش SDS-PAGE و وسترن بلاتینگ استفاده شد. سپس به رت ماده تزریق و عملکرد پروتئین بررسی شد. نتایج: بیان پروتئین با استفاده از تست الایزا در ۴۵۰ نانومتر mIU/ml ۵۳۸/۴۳ تائید شد. در مرحله تخلیص با روش کروماتوگرافی افینیتی، پیک مربوط به FSH در بازه زمانی حدود ۹/۷ دقیقه مشاهده و راندمان تخلیص ۷۰% محاسبه شد. وجود باند ۴۵ کیلودالتونی بر روی ژل و غشای PVDF پس از تخلیص، حضورFSH را تائید نمود. افزایش وزن تخمدان بعد از تزریق، عملکردی بودن پروتئین را تائید نمود. نتیجه گیری: در حال حاضر تولید هورمون های نوترکیب از نیازهای کشور محسوب می شود، بنابراین دست یابی به این هدف ارزشمند نیاز به برنامه ریزی بلندمدت دارد و ما در این پژوهش سعی نمودیم این مسیر را به منظور تولید هورمون FSH انسانی به عنوان یک داروی نوترکیب موثر در درمان ناباروری هموار نماییم.کلیدواژه ها
انتقال, بیان, E.coli, FSH, سلول تخمدان همستر چینیاطلاعات بیشتر در مورد COI
COI مخفف عبارت CIVILICA Object Identifier به معنی شناسه سیویلیکا برای اسناد است. COI کدی است که مطابق محل انتشار، به مقالات کنفرانسها و ژورنالهای داخل کشور به هنگام نمایه سازی بر روی پایگاه استنادی سیویلیکا اختصاص می یابد.
کد COI به مفهوم کد ملی اسناد نمایه شده در سیویلیکا است و کدی یکتا و ثابت است و به همین دلیل همواره قابلیت استناد و پیگیری دارد.